HPLC

Moderator: ArcherBarry

Reageer
Berichten: 244

HPLC

Hallo allemaal,

Ik ben de afgelopen weken veel met HPLC bezig geweest op school. Hierbij moest ik uiteraard standaarden en monsteroplossingen (caffeine in cola bepaling) bereiden en meten.

Al het glas dat in de kast staat op school is nat, het wordt niet droog gemaakt na een experiment. Ik vul mijn kolven aan met eluens, dat is het oplosmiddel voor al mijn oplossingen.

Echter, er wordt op school gezegd dat je de kolven droog moet maken of driemaal met eluens moet spoelen indien je kwantitatief nauwkeurig bezig gaat zijn, en dat dat niet hoeft als je kwalitatief gaat werken.

Ik snap het niet helemaal, want op voorwaarde dat het oplosmiddel van je analiet niet sterker is dan je eluens, verandert er niets aan je retentietijd. Hooguit je piekvorm zal iets verbeteren, door het kleine beetje meer water. Is het gewoonte als je kwantitatief nauwkeurig werkt, dit soort dingen ook zo goed mogelijk te doen?

Wat kan ik het beste doen? Bijvoorbeeld zeggen, bij maatkolven kleiner dan 50 ml maak ik de boel droog of spoel ik met eluens en vanaf 50 of hoger acht ik de relatieve fout die ik maak niet significant en laat ik het nat.

Meningen hierover?

Berichten: 83

Re: HPLC

Een probleem met nat glaswerk en het bereiden van stockoplossingen hierin, is dat de concentratie niet nauwkeurig genoeg is. Wanneer je droog glaswerk gebruikt is het wel een stuk nauwkeuriger.

Als ik jou was zou ik al het glaswerk droog maken!

Berichten: 244

Re: HPLC

Dat begrijp ik niet: hoezo zou een concentratie niet nauwkeurig genoeg zijn als glaswerk nat is?

Berichten: 83

Re: HPLC

Je lost een bepaalde massa van je component op in je eluens.

Hieruit volgt een concentratie.

Maar wanneer je eigenlijk meer vloeistof in je glaswerk hebt dan je denkt dat er in zit (extra vloeistof doordat glaswerk nat is) is je concentratie die je denkt te hebben, minder nauwkeurig met de werkelijke concentratie.

Maar dit is alleen voor analytische testen van belang. Maak gewoon al het glaswerk droog, dit is verstandiger.

Berichten: 244

Re: HPLC

Alles? Voor reagentia oplossingen hoeft het niet droog lijkt me?

Voor analytische oplossingen: de een zegt van wel, de ander zegt van niet, opzich als ik een maatkolf volgens de regels aanvul tot de streep zou dat volume er gewoon in moeten zitten. Dat zeggen die mensen zelf ook, maar toch zeggen ze dan dat je moet drogen. Ik wil dat gerust doen, maar het staat toch niet professioneel als het niet nodig is?

Waarom moet het dan, omdat ik het dan niet zoals gezegd in 50/50 water/methanol maar in 54/46 water/methanol heb opgelost? Verschil in retentietijd geeft het niet...

Voor analytische oplossingen zal ik het dan wel doen, maar voor dingen als het maken van eluens lijkt het me niet echt nodig? Het zal een fout van 2 a 3 promille opleveren, die fout valt toch in het niet bij andere fouten?

Gebruikersavatar
Berichten: 6.314

Re: HPLC

Ik geef je gelijk Pim dat het effect zeer klein is.

Maar het is wel zo, als je het écht goed wil doen, moet je het zo doen.

Maar, reken eens uit wat de andere fouten zijn die je kunt maken en kijk dan of een 50.05/49.95 mengsel nou zoveel uitmaakt... (want dat is meer de orde waar het over gaat dan 54/46).
You can't possibly be a scientist if you mind people thinking that you're a fool. (Douglas Adams)

Berichten: 244

Re: HPLC

Dus Beryllium,
Maar het is wel zo, als je het écht goed wil doen, moet je het zo doen.
Als ik wat echt goed wil doen? :oops: Dit gaat neem ik aan over analytische oplossingen en over het drogen van maatkolven, ook al wil je ze aanvullen met 50/50 water/methanol?

Met die 50,05/49,95 bedoel jij neem ik aan de compositie van het eluens zelf. Ik heb laatst getest hoeveel water het is wat je extra toevoegt met nat glaswerk, het gaat over 2 a 3 mL. Maar je maakt ook een tolerantiefout met de maatcilinder, een afleesfout met de maatcilinder, eventueel (slecht :p) morsen. Dus ik zou zeggen, dat die 2 a 3 mL niet uitmaakt.

Nog iets anders over het maken eluens: ik kwam erachter dat mijn organische component na ontgassing 15 graden celsius was en de waterige 20 graden celsius. Hoe moet ik dat dan doen met de organische component, verwarmen tot kamertemperatuur? Anders maak ik wel een flinke fout...

Verder Beryllium, als je een reagens gaat maken, dan ga je de boel toch niet drogen?

Berichten: 83

Re: HPLC

Dat bedoelde ik inderdaad.

Alleen als je heel precies een bepaling moet doen is het verstandig om glaswerk te drogen.

Voor je eluens is het niet van belang.

Reageer