Springen naar inhoud

Kwantitatieve eiwitbepaling van eiwit in ei


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Roodjuh

    Roodjuh


  • 0 - 25 berichten
  • 5 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 17 oktober 2011 - 16:31

Beste chemisten,

Het klinkt een beetje vreemd dat ik deze vraag stel, aangezien er in mijn profiel te lezen is dat ik biochemie als ťťn van mijn specialiteiten heb staan. Helaas heb ik nu een probleem met het verwerken van wat onderzoeksresultaten van een practicum wat ik heb moeten uitvoeren. Ik ben al ruim 2 weken aan het gissen wat ik nu precies of verkeerd heb gedaan of wat ik nu fout bereken en google kon me ook niet meer verder helpen, vandaar mijn registratie.

Ik moet uitzoeken hoeveel gram eiwit per 100 gram wit van een ei een ei bevat. Dit heb ik moeten doen door met een spectofotometer de extinctie te meten. Aan de hand van een ijklijn die is ontstaan uit een BSA oplossingsreeks moet ik nu de eiwitconcentratie van mijn wit van een ei bepalen.

Ik heb op dit moment erg veel moeite met het berekenen van de uiteindelijke concentratie. Het probleem wat ik tegenkom is dat naar mijn inzicht de uitkomsten van mijn berekeningen teveel uit elkaar liggen.

Even in het kort:

De ijklijn die is gemaakt heeft de volgende formule: E = c x 0,0622

- Ik heb het wit van een ei moeten aanlengen met 200 ml NaCL oplossing, dit bracht mijn totale oplossing op een hoeveelheid van 235 ml (oftewel ik heb 35 ml wit van een ei om mee te beginnen) dit noemen we oplossing 1.
- In een maatkolf ging 5 ml van oplossing 1 en dit werd aangelengd tot 100 ml (oplossing 3
- In een andere maatkolf ging 5 ml van oplossing 2 en dit werd aangelengd tot 50 ml (oplossing 2)

- Reageerbuiswerk (wat buiten de berekening is gehouden):
Reageerbuis 1 - 2 ml oplossing 1 + 2ml gedes. water + 3 ml biureet
Reageerbuis 2 - 2 ml oplossing 2 + 2ml gedes. water + 3 ml biureet
Reageerbuis 3 - 2 ml oplossing 3 + 2ml gedes. water + 3 ml biureet

- Uitkomsten (extinctie):
Reageerbuis 1: 0,693
Reageerbuis 2: 0,056
Reageerbuis 3: 0,009

- Eerste berekening om concentratie van de oplossingen te berekenen (c = E / 0,0622
Reageerbuis 1: 0,693 = 11,141 mg/ml
Reageerbuis 2: 0,056 = 0,900 mg/ml
Reageerbuis 3: 0,009 = 0,144 mg/ml

- Problemen met de berekening (de vraag dus):
Met deze uitkomsten moet ik nu concentratie eiwit gaan berekenen. Ik heb hier alleen de grootste moeite mee. Ik ben nu al een tijdje bezig verschillende berekeningen er op los te laten en ik heb nog steeds geen uitkomsten die ik aanvaardbaar vind. Ik heb namelijk zelf het idee dat de uitkomsten dicht bij elkaar moeten liggen.

Wat ik al heb gedaan:

- Biureet 3ml + gedestileerd water 2 ml buiten beschouwing gelaten.

Poging 1 (wat mij zelf logisch leek):

Uitkomst gaat over wat er aan mg per ml in de desbetreffende oplossing zit. Om erachter te komen hoeveel mg per ml in het wit van een ei er zit moet het volgende gebeuren:

reageerbuis 1: is direct, dus antwoord zo laten.
reageerbuis 2: 5 ml in 50 ml --> verdunning van 10 dus x 10
reageerbuis 3: 5 ml in 100 ml --> verdunning van 20 dus x 20

Wat krijg je daaruit:

c reageerbuis 1 x 1 = 11,141 mg/ml x 1 = 11,141
c reageerbuis 2 x 10 = 0,900 mg/ml x 10 = 9,00
c reageerbuis 3 x 20 = 0,144 mg/ml x 20 = 2,88

Poging 2 (volgens wat ik begreep van docent):

Uitkomst gaat over wat er per mg per ml in de desbetreffende oplossing zit. Maar gaat dus eigenlijk over hoeveel mg per ml er in je 5 ml genomen zit. Oftewel, je hebt de ene reageerbuis tot 50 ml aangelengd, de andere tot 100, dus moet je de antwoorden x 50 en x 100 doen.

c reageerbuis 1 x 1 = 11,141 mg/ml x 1 = 11,141 mg/ml
c reageerbuis 2 x 50 = 0,900 mg/ml x 50 = 45 mg/ml
c reageerbuis 3 x 100 = 0,144 mg/ml x 100 = 14,4 mg/ml

Bij beide methode ga ik ervan uit dat deze antwoorden al bij elkaar moeten liggen. De volgende stap die ik moet maken is uitrekenen wat de oplossing van 35 ml aangevuld tot 235 ml met NaCL oplossing voor invloed heeft op de uitkomsten. Ik ga er dan ook vanuit dat het laatste stukje ongeveer zo gaat.

Uitkomsten van probleem berekening moeten worden gezien als concentratie die toebehoort aan de 235 ml NaCl oplossing met mijn wit van ei, oftewel, ik moet berekenen wat de concentratie dan is van de 35 ml wit van een ei. Dus zorg ik dat ik dat ik mijn uitkomsten x 235/35 (6,714) = uiteindelijke gram per ml van 35 wit van een ei x 100/35 (2,857) = ml per 100 ml wit van een ei.

Ik hoop dat ik zo duidelijk heb gemaakt wat mijn probleem is en wat ik al geprobeerd heb. Ik worstel hier nu al een tijdje mee, dus ik zou erg blij zijn als iemand mij hier verder mee kan helpen.

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

*_gast_Gerard_*

  • Gast

Geplaatst op 17 oktober 2011 - 19:13

Alles stap voor stap

Reageerbuis 1: 0,693 = 11,141 mg/ml
Reageerbuis 2: 0,056 = 0,900 mg/ml
Reageerbuis 3: 0,009 = 0,144 mg/ml

Reageerbuis 1 - 2 ml oplossing 1 + 2ml gedes. water + 3 ml biureet
Reageerbuis 2 - 2 ml oplossing 2 + 2ml gedes. water + 3 ml biureet
Reageerbuis 3 - 2 ml oplossing 3 + 2ml gedes. water + 3 ml biureet

Buis 1 bevat 7 ml dus 7 x 11,141 mg ~ (7 x 11,141 )/2 mg eiwit/ml oplossing 1
Buis 2 bevat 7 ml dus 7 x 0.900 mg ~ (7 x 0.900 )/2 mg eiwit/ml oplossing 2
Buis 3 bevat 7 ml dus 7 x 0.144 mg ~ (7 x 0.144)/2 mg eiwit/ml oplossing 3

Buis 1 onverdund concentratie (7 x 11,141 )/2 mg eiwit/ml
Buis 2 10 x verdund (50/5) concentratie 10 x (7 x 0,900/2 mg eiwit/ml
Buis 3 20 x verdund (100/5) concentratie 20 x (7 x 0,144)/2 mg eiwit/ml

en hoe gaat het nu verder?

#3

Roodjuh

    Roodjuh


  • 0 - 25 berichten
  • 5 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 18 oktober 2011 - 11:34

Dankjewel voor het meedenken Gerard!

Als ik jouw/uw methode gebruik, kom ik op het volgende uit:

Reageerbuis 1: 38,9935 mg/ml (per 1 ml eiwitoplossing)
Reageerbuis 2: 30,15 mg/ml (per 1 ml eiwitoplossing)
Reageerbuis 3: 10,016 mg/ml (per 1 ml eiwitoplossing)

Deze eiwitoplossingen komen uit een oplossing waarbij 35 ml wit van een ei werd opgelost in NaCL oplossing tot 235 ml. Oftewel, de uitkomsten moeten vermenigvuldigd worden met 235/35 (6,714), om dat het in dit geval over 35 ml gaat, moet dit nog naar 100 ml worden gebracht door middel van een vermenigvuldiging van 100/35.

Reageerbuis 1: 38,9935 mg/ml x 235/35 x 100/35 = 684,02 =0,68 g/100ml
Reageerbuis 2: 30,15 mg/ml x 235/35 x 100/35 = 578, 33 = 0,58 g/100ml
Reageerbuis 3: 10,016 mg/ml x 235/35 x 100/35 =176,56 = 0,18 g/100ml

Helaas moet ik nu weer wat fout hebben gedaan (ik voel me vast heel stom als ik het antwoord hoor), want op wikipedia zijn de volgende waarden te vinden:

54% Ovalbumin - Nourishment; blocks digestive enzymes[citation needed]
12% Ovotransferrin - Binds iron[citation needed]
11% Ovomucoid - Blocks digestive enzymes[citation needed]
4% Ovoglobulin G2
4% Ovoglobulin G3
3.5% Ovomucin
3.4% Lysozyme
1.5% Ovoinhibitor
1% Ovoglycoprotein
0.8% Flavoprotein
0.5% Ovomacroglobulin
0.05% Avidin
0.05% Cystatin

Oftewel, ik moet uitkomsten hebben die in de tientallen grammen lopen, niet in tiende.

#4

*_gast_Gerard_*

  • Gast

Geplaatst op 18 oktober 2011 - 18:20

Stap voor stap en je ziet de fout ;)
Oplossing 1
38,9935 mg/ml
335 ml ~ 13062 mg eiwit ~ met hoeveelheid eiwit in 35 ml stock
1 ml stock bevat 13062/35=373 mg eiwit
100 ml stock 37300 mg=37.3 g

Veranderd door Gerard, 18 oktober 2011 - 18:23


#5

Roodjuh

    Roodjuh


  • 0 - 25 berichten
  • 5 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 18 oktober 2011 - 22:40

Reageerbuis 1: 38,9935 mg/ml (per 1 ml eiwitoplossing)
Reageerbuis 2: 30,15 mg/ml (per 1 ml eiwitoplossing)
Reageerbuis 3: 10,016 mg/ml (per 1 ml eiwitoplossing)

Reageerbuis 1: 38,9935 mg/ml x 235 = 9163,4725 : 35 = 261,8135 --> 26,18 g/100 ml
Reageerbuis 2: 30,15 mg/ml x 235 = 7085,25 : 35 = 202,435714 --> 20,24 g/ml
Reageerbuis 3: 10,016 mg/ml x 235 = 2353,76 : 35 = 67,25028- --> 6,73 g/ml

Dit moet het dan zijn, komt een stuk geloofwaardiger over. Ik dank u hartelijke Gerard en ik ga gelijk m'n chemlevel even aanpassen.

Blijkbaar is de scheikundige kennis die ik heb meegekregen in mijn biologieopleiding niet afdoende om niveau 5 te zijn =p.

#6

*_gast_Gerard_*

  • Gast

Geplaatst op 19 oktober 2011 - 07:48

Een advies nog: schrijf de berekening duidelijk op
Dit bv 38,9935 mg/ml x 235 = 9163,4725 : 35 = 261,8135 --> 26,18 g/100 ml is doodgewoon fout.

(38,9935 mg/ml x 235) is niet gelijk aan (9163,4725 : 35) :cry:

Nu is het misschien wel duidelijk voor je maar het lokt gewoon fouten uit. ;)

#7

Roodjuh

    Roodjuh


  • 0 - 25 berichten
  • 5 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 19 oktober 2011 - 11:25

Als ik het zo zie, dan bedoel je te zeggen dat de uitkomsten wel kloppen, maar de manier waarop de berekening is opgeschreven is fout. In mijn verslag heb ik het uitgebreider opgeschreven, dus moet het als het goed is wel goed staan (ik dubbel check het even).

In ieder geval nogmaals bedankt voor de moeite, het heeft me erg geholpen.





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures