Springen naar inhoud

[scheikunde] paar vraagjes over een practicum over alfa-amylase


  • Log in om te kunnen reageren

#1

bertb585

    bertb585


  • >100 berichten
  • 212 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 04 december 2011 - 16:40

In een practicum proberen we het reducerend vermogen en activiteitsbepaling van alfa-amylase te achterhalen. Het principe is:" wateroplosbaar zetmeel(vooral amylose) wordt door alfa-amylase afgebroken bij 25 C en pH 6.8 in aanwezigheid van NaCl. De activiteit wordt absoluut bepaald en uitgedrukt in nkat/ml(katal= aantal mol glycosidische bindingen die per seconde gesplitst worden) De gevormde reducerende groepen worden iodometrisch bepaald." We werken dus met 2 erlenmeyers(n met onbekende en n met een blanco): we doen in elk de zetmeeloplossing, vervolgens in elk de een bufferoplossing, elk in een warmwaterbad van 25 C, bij de onbekende de enzymoplossing( niet bij de blanco), bij elk 10 min wachten, bij elk HCl toevoegen, bij de blanco de enzymoplossing toevoegen, en dan bij elk de iometrie uitvoeren.

mijn vraagjes hierover:

1) De bufferoplossing is zeker om de constante pH van 6.8 te behouden?

2) Waarom wordt NaCl toegevoegd?

3) Waarom wordt HCl toegevoegd? Is dit niet om de enzymactiviteit stop te zetten, in het recept staat 1M HCl dus ik vermoed dat het dit is,

Alvast bedankt!

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

zheddie

    zheddie


  • >100 berichten
  • 150 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 04 december 2011 - 16:53

1) Correct, zodat de enzymatische activiteit zo constant mogelijk blijft.
2) Ben ik niet zo heel zeker, maar misschien om het enzyme beter oplosbaar te houden. (afscherming van ladingen)

3) Ook correct. Door toevoegen van een grote hoeveelheid sterk zuur zal de tertiaire structuur van het eiwit verloren gaan, m.a.w.: het enzym verliest zijn functie.

#3

bertb585

    bertb585


  • >100 berichten
  • 212 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 04 december 2011 - 18:52

ik heb ook nog een paar vraagjes over het verdere verloop van het practicum( de iodometrische tritratie):

1) Ze vermelden hier dat "bij elke splitsing een een eindstandige alpha-glucose, dus een hemiacetalgroep of een reducerend groep vrijkomt. De gevormde reducerende groepen worden iodometrisch bepaald". Vervolgens vermelden ze 3 reacties die plaatsvinden bij de titratie waarvan ik n niet begrijp waar ze vankomt. RCOH(aldehyde) + H2O => RCOO- +3H+ +2e- ?? Ik dacht ten eerste dat als een aldehyde reageert met water er een hydraat gevormd werd en ten tweede van waar haalt men die aldehyde??

Alvast bedankt

PS: ik denk ook dat NaCl voor de oplosbaarheid is.(bedankt!)

#4

zheddie

    zheddie


  • >100 berichten
  • 150 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 04 december 2011 - 19:01

Die reactie is toch een oxidatie van het aldehyde naar een carbonzuur?
Dit is dus eigenlijk een van de deelreacties van de redoxreactie.

#5

bertb585

    bertb585


  • >100 berichten
  • 212 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 04 december 2011 - 19:03

ja, ok maar waar komt die aldehyde vandaan? Dat zit toch niet in je alpha-glucose die wordt afgesplitst?

#6

zheddie

    zheddie


  • >100 berichten
  • 150 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 04 december 2011 - 19:11

De niet cyclische vorm van glucose bevat een aldehyde, die opnieuw vrijkomt (uit de cyclische vorm) tijdens de redoxreactie.

#7

bertb585

    bertb585


  • >100 berichten
  • 212 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 21 december 2011 - 08:58

Bij het instuderen van het practicum botste ik nog op een paar vraagjes.

1) wat kan je zeggen over de activiteit van alpha-amylase als er 2 ml amylase toegevoegd wordt ipv 1 ml en dezelfde hoeveelheid thiosulfaat wordt verbruikt?

=> volgens mij vermindert die

2) wat men de activiteit als er 50 ml amylose wordt toegevoegd en evenveel thiosulfaat wordt verbruikt?

=> volgens mij vermindert die ook

3) wat gebeurt er met de poly en oligosacchariden na stopzetting enzymactviteit?

=> dat weet ik eigenlijk niet.

Kan iemand hierbij nog eens helpen?

#8

popsy

    popsy


  • >25 berichten
  • 37 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 08 januari 2012 - 18:23

Bij het instuderen van het practicum botste ik nog op een paar vraagjes.

1) wat kan je zeggen over de activiteit van alpha-amylase als er 2 ml amylase toegevoegd wordt ipv 1 ml en dezelfde hoeveelheid thiosulfaat wordt verbruikt?

=> volgens mij vermindert die

2) wat men de activiteit als er 50 ml amylose wordt toegevoegd en evenveel thiosulfaat wordt verbruikt?

=> volgens mij vermindert die ook

3) wat gebeurt er met de poly en oligosacchariden na stopzetting enzymactviteit?

=> dat weet ik eigenlijk niet.

Kan iemand hierbij nog eens helpen?

Bij die 3e vraag kan ik 2 mogelijkheden bedenken: ofwel niks omdat je de activiteit stil legt, ofwel: als we de activiteit stil leggen, doen we dit door HCl toe te voegen, een sterk zuur is een katalysator dat de hydrolyse van glycosidische bindingen bevordert, dus misschien zullen de polysacchariden en oligosacchariden dan volledig afgebroken worden tot glucose monomeren...
Groetjes

#9

nathanD

    nathanD


  • 0 - 25 berichten
  • 3 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 17 december 2015 - 20:12

Bij die 3e vraag kan ik 2 mogelijkheden bedenken: ofwel niks omdat je de activiteit stil legt, ofwel: als we de activiteit stil leggen, doen we dit door HCl toe te voegen, een sterk zuur is een katalysator dat de hydrolyse van glycosidische bindingen bevordert, dus misschien zullen de polysacchariden en oligosacchariden dan volledig afgebroken worden tot glucose monomeren...
Groetjes

zijn de 2 andere vragen correct? want om de activiteit te bepalen van alfa-amylase komen de volumes van amylose als amylase toch niet in de formule? waardoor uw activiteit toch hetzelfde blijft?






0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures