Wetenschapsforum

Ilse1991

Hallo,

Ik moet voor school een berekening uitvoeren m.b.t. PCR. Ik heb alleen geen idee waar ik moet beginnen.

Zo luidt de opdracht: De eindconcentratie van de primers in de realtime PCR wordt 0,2 uM en van de probes 0,05 tot 0,1 uM, afhankelijk van de probe. Bereken nu hoeveel PCR"s je kunt doen met deze batch primers en probes. Het volume van 1 PCR-reactie is 25 ul. Ga uit van een probeconcentratie van 0,1 uM. Tip: Bereken het aantal PCR"s van de oligo waar je het minst van hebt maar houdt rekening met de probeconcentratie.

Fw 1 Forward gen 12,7 (nM) 635 (Volume water tot 20 uM/ul

)

Rev 1 Reverse gen 18,4 920

Probe 1 Probe gen 17,1 855

Fw 2 Forward genoom 19,4 970

Rev 2 Reverse genoom 15,0 750

Probe 2 Probe genoom 12,5 625

Volgens mij is het niet zo moeilijk, maar ik heb echt geen idee waar ik moet beginnen. Kan iemand mij op weg helpen?

zheddie

Je berekent het aantal mol nodig voor 1 PCR reactie (in 25 µl) Zowel van probes als van primers. Dan zou je moeten berekenen over hoeveel mol primer/probe je in totaal beschikt. Deel je dit laatste door het eerste, dan bekom je het aantal keren dat je een PCR kan uitvoeren (waarbij de laagste verhouding telt).

Ik geraak wel niet echt wijs uit hetgene wat onderaan je bericht staat, maar dat zou het principe moeten zijn.

Ilse1991

Probe 2 is 12,5 nM

Probe concentratie gewenst: 0,1 uM

PCR-volume per reactie: 25 ul

25 ul = 0,000025 L

0,1 uM = 1*10-7 M

Mol/liter = molariteit --> mol/0,000025 = 1*10-7 M

Mol = (1*10-7) * 0,000025 = 2,5*10-12 = 2,5*10-3 = 0,0025 nM probe bij 1 reactie nodig.

Je hebt 12,5 nM. Dus 12,5 nM/0,0025 = 5000 reacties kunnen er gedaan worden

Dat kan volgens mij niet echt kloppen??

zheddie

maar hoeveel volume heb je van je stock?

Ilse1991

Ik heb het nagevraagd bij de docent en het is wel goed. In deze orde van grootte moet er gedacht worden. Probleem opgelost

Wetenschapsforum

Laatste berichten

Nieuwsberichten

PCR

PCR

Re: PCR

Re: PCR

Re: PCR

Re: PCR