Springen naar inhoud

Spiritus aantonen mbv HPLC


  • Log in om te kunnen reageren

#1

janklaassen

    janklaassen


  • 0 - 25 berichten
  • 6 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 12 februari 2012 - 15:00

Hallo,
ik had een vraag, en zou het fijn vinden als iemand me verder kon helpen.

Ik moet spiritus gaan aantonen met behulp van HPLC.
Ik kreeg echter weinig juiste voorschriften gevonden over hoe ik dit aan moet gaan pakken.
Eigenlijk ben ik op zoek naar de blauwe kleurstof die is toegevoegd aan spiritus, omdat ik weet dat de rest makkelijk in water oplosbaar is (bevat voornamelijk ethanol).
Ik zou het op prijs stellen al heeft iemand een protocol/voorschrift liggen, of hij me kan vertellen wat voor eluens ik bijvoorbeeld moet gebruiken.

Alvast bedankt!

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

soepkip88

    soepkip88


  • >100 berichten
  • 226 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 12 februari 2012 - 18:01

Volgens mij is de kleurstof methyleenblauw. Dan moet je zelf maar eens wat testen hoe je het makkelijkste scheiding krijgt..

#3

janklaassen

    janklaassen


  • 0 - 25 berichten
  • 6 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 12 februari 2012 - 19:20

De kleurstof die er waarschijnlijk in moet zitten is Methylviolet 2B, 6B of 10B. Ook is er een kans dat er Victoria Blue in zit.
Het punt is alleen dat ik qua praktijk niet veel tijd heb om veel testen met het eluens te doen. Daarom zou ik graag willen weten in welke richting ik ongeveer moet zoeken?

#4

Jooken

    Jooken


  • >250 berichten
  • 677 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 12 februari 2012 - 23:15

Ik neem aan dat je kan beschikken over de meest gangbare opstelling voor HPLC, en een C18 kolom gebruikt en methanol als eluent. Je hebt natuurlijk geen idee bij welke verhouding methanol/water die stoffen uit de kolom komen. Je kan dan de volgende strategie volgen.

Neem een reeks chromatogrammen op bij 100% MeOH ; 80% MeOH/20%H2O ; 60% MeOH/40% H2O enz. tot alles er op een redelijke retentietijd uitkomt.

Als je spritus injecteert (95% ethanol!) moet je je wel realiseren dat dit een ZEER sterk eluent is. Beste verdun je je monster met water, en injecteer je zo weinig mogelijk (bij voorkeur 5 ĶL of zelf minder) om piekdistorsie te beperken.

succes!

#5

janklaassen

    janklaassen


  • 0 - 25 berichten
  • 6 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 13 februari 2012 - 10:49

Ik kan inderdaad beschikken over de meest gangbare opstelling voor HPLC, met een C18 kolom.

De bedoeling is dus dat ik een gradiŽnt opneem van bijv. 90% MeOH / 10 % H2O tot 10 % MeOH / 90 % H20?
Want ben je er 100% zeker van dat ik MeOH/H20 als eluens moet gebruiken, want spiritus in nederland bevat zelf ook methanol, en als je deze als eluens gebruikt, kan je deze toch niet meer terug vinden in het chromatogram?

Mijn taak is om aan te tonen of er spiritus terug gevonden kan worden in een shirt, en wat dit voor invloed heeft als deze uitgewassen wordt. Ik ben dus eigenlijk puur op zoek naar de blauwe kleurstof, omdat de rest van spiritus in water oplosbaar is.

Voordat ik de blauwe kleurstof aan kan tonen, moet ik dus wel eerst weten hoe spiritus er uit komt te zien in een chromatogram.
Dus de bedoeling is dan denk ik, dat ik eerst een verdunde spiritus oplossing moet injecteren, en hiervan de optimale instellingen bepalen, en wanneer ik dat voor elkaar heb dan kan ik het monster (afkomstig van extractie shirt) injecteren?

Verder moet ik nog weten op wat voor golflengte ik moet meten, dit kan denk ik het beste met behulp van een UV-VIS spectrofotometer? Want dan neem ik een absorptiemaximum op van de verdunde spiritus. Corrigeer me als ik dit fout heb aub.

Hopelijk zit ik nu in de goede richting, zo niet, corrigeer me aub.

Alvast bedankt!

Veranderd door janklaassen, 13 februari 2012 - 13:01


#6

Jooken

    Jooken


  • >250 berichten
  • 677 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 13 februari 2012 - 14:57

De bedoeling is dus dat ik een gradiŽnt opneem van bijv. 90% MeOH / 10 % H2O tot 10 % MeOH / 90 % H20?


Neen, als je een gradiŽnt opneemt moet die gaan van het zwakke naar het sterke eluent, dus, bvb van 10% MeOH/90% Water naar 90% MeOH/10% water

In principe werkt een gradiŽnt natuurlijk ook, maar bij de aanvang van de gradiŽnt zit je met een zeer zwak eluent, terwijl je monster een zeer sterk eluent is. Die twee gaan niet goed samen. Het resultaat gaat zijn dat de retentietijden niet reproduceerbaar zijn (je component elueert onder invloed van het injectiesolvent, ethanol of methanol) en ik veronderstel dat de juiste retentietijd de basis van de identificatie is, dus die moet reproduceerbaar kunnen bepaald worden.

Ik bedoelde een reeks van isocratische chromatogrammen, ieder met ca. 20% minder methanol dan het vorige. De methanol (of ethanol) die in spritus aanwezig is kan je nooit terugvinden in het chromatogram, omdat je normaal met UV-zichtbaar licht absorptie als detectie werkt, en eenvoudige alcoholen absorberen geen licht.

De golflengte voor de detectie kan je inderdaad vinden door een UV-zichtbaar licht spectrum op te nemen met een spectrofotometer, en dan de golflengte van het hoogste maximum te kiezen.

Veranderd door Jooken, 13 februari 2012 - 14:59






0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures