Springen naar inhoud

Zouten in de HPLC


  • Log in om te kunnen reageren

#1

FrenkvdBerg

    FrenkvdBerg


  • 0 - 25 berichten
  • 6 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 29 maart 2012 - 09:54

Hallo allemaal,


Dit is mijn eerste vraag op het forum aangezien ik vooral probeer de problemen zelf op te lossen.
Nu zit ik met een probleem en ik hoop dus dat jullie mij kunnen helpen!

Als afstudeerstage moet ik een bepaalde analyse doen mbv HPLC techniek (optimaliseren/valideren/implementeren etc).
Ik gebruik een 5Ķm C6 (RP) kolom met als eluens MeOH/THF/Fosfor-buffer in de verhouding 45/45/10.

Nu het probleem:
De HPLC die ik gebruik heeft nogal wat problemen. In de afgelopen 2 maanden heb ik zowat elke tubing in het apparaat vervangen door 'blokkades' . Deze zorgen ervoor dat mijn druk opeens erg toenam tot de maximale waarde. Ook vond ik op de plunjers meestal een soort aanslag, wat later (door de hulp van XRF en een mooie microscoop) calciumfosfaten blijken te zijn. De calcium komt waarschijnlijk door het demiwater wat ik gebruikte voor de fosfor-buffer (ik weet het, dom dom dom dom). Ik ben nu begonnen met het spoelen van de HPLC mbv een azijnzuur buffer (zonder kolom).


Nu de vragen:
-Waarmee kan ik calciumfosfaten oplossen zodat deze uit het systeem gespoeld worden? (lost niet goed op in water)
-Bevat demiwater, vergeleken met miliQ, nog een hoog calcium gehalte?

Alvast bedankt voor jullie hulp ;)

Groet,
Frenk

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Jooken

    Jooken


  • >250 berichten
  • 677 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 29 maart 2012 - 10:40

Calciumfosfaat is dermate slecht oplosbaar dat het alleen mechanisch (= door wrijven en poetsen) kan verwijderd worden. Inwendige onderdelen die aangetast zijn moeten vervangen worden. Slecht nieuws dus!

In een HPLC horen enkel solventen van HPLC kwaliteit, dat geldt ook voor het water. Demiwater is bijlange na niet zuiver genoeg voor een HPLC. Enkel vers bereid ultrapuur water gebruiken!

Buffers en dergelijke filtreer je best over een 0,45 Ķm filter voordat je ze in de voorraadfles van het toestel doet.

#3

FrenkvdBerg

    FrenkvdBerg


  • 0 - 25 berichten
  • 6 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 29 maart 2012 - 11:29

Verwijder je bij het filteren ook de overgebleven calcium?
Aangezien miliQ toch nog 0,2 ppm calcium bevat.

#4

Jooken

    Jooken


  • >250 berichten
  • 677 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 29 maart 2012 - 15:34

De productbrochure van Millipore geeft als maximum concentratie van Ca2+
0.1 ppt aan, een verwaarloosbare concentratie. 0.2 ppm lijkt mij zeer veel voor ultrapuur. Mischien moet je toch eens de werking van het toestel controleren, en/of de cartridge vervangen.

Een buffer maak je aan door de zure component en de basische component te mengen tot de pH juist is. Vervolgens zou ik de resulterende buffer filteren. Op die manier verwijder je het eventueel gevormde Ca3(PO4)2

Wij gebruiken hier al meer dan 10 jaar routine analyses, met een oplossing van 25 mM H3PO4 als waterige component. Wij hebben nog nooit last gehad van precipitatie, maar wij gebruiken wel de hoogste zuiverheidsgraad van fosforzuur beschikbaar, en ultrapuur water om de oplossing te maken.

#5

FrenkvdBerg

    FrenkvdBerg


  • 0 - 25 berichten
  • 6 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 29 maart 2012 - 18:57

Ja dat is waar, maar daar is het nu een beetje te laat voor.
Nu moet ik het eruit zien te krijgen.
Ik vraag me af of onderdelen in een warm ultrasoonbad wat zou doen

#6

FrenkvdBerg

    FrenkvdBerg


  • 0 - 25 berichten
  • 6 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 02 april 2012 - 10:21

De druk is weer stabiel.
Misschien heeft het lange spoelen met MeOH toch nog nut gehad.

Ik vergeet even het zoutprobleem en gebruik nu dezelfde eluens maar dan bereid met miliQ water.
Ook filtreer ik nu het eluens voordat ik het gebruik.

Ik zal zo nu en dan de plunjers en seals bekijken of er nog zout aanslag is.

Iig bedankt voor de reacties.
Groet, Frenk





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures