Springen naar inhoud

Suspensie injecteren in HPLC


  • Log in om te kunnen reageren

#1

*_gast_Lenus_*

  • Gast

Geplaatst op 09 mei 2012 - 10:24

Mag men verdunde melk (1/2 of meer) injecteren in een HPLC toestel?

Of MOET men deze eerste behandelen zodat een oplossing krijgt (en geen suspensie)

grtz

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

pimmodenhollander1

    pimmodenhollander1


  • >100 berichten
  • 244 berichten
  • Validating

Geplaatst op 09 mei 2012 - 13:23

Wat denk je zelf? Je hebt hier te maken met deeltjes - de HPLC pakking - van meestal ongeveer 5 micrometer groot. Als jij daar deeltjes introduceert en melk bevat veel deeltjes, dan verstop je de kolom in zeer rap tempo, dat is niet de bedoeling!

Dus ja, inderdaad eerst behandelen - filtratie over een 0,45 micron filter bijvoorbeeld

Bedenk, bij HPLC mag je monster en ook oplosmiddel GEEN deeltjes bevatten. Zoek op google maar eens naar HPLC filtration, veel te vinden hoor.

Veranderd door pimmodenhollander1, 09 mei 2012 - 13:23


#3

*_gast_Lenus_*

  • Gast

Geplaatst op 09 mei 2012 - 20:00

Merci.

Ik moest methadone.HCl aantonen in volle melk maar mijn scheiding (Wojnar-Horton R.E. et al., 1997) wou niet lukken. Nu heb ik geen resultaat terwijl Iemand anders de melk had verdund en zo op de kolom gespoten.
De docent had het goedgekeurd. Dus begon ik mezelf in vraag te stellen en te twijfelen (want in de pharmacopea staat ook dat het niet 'toegelaten' is).

Enig idee wat de reactie zou kunnen zijn tussen isoamyl alcohol : hexaan (1:99) en melk?
Ik kreeg na centrifugatie altijd 2 fasen maar mijn organische fase werd een gel.
Een reactie met de aanwezige vetten of eiwitten?

#4

Benm

    Benm


  • >5k berichten
  • 8784 berichten
  • VIP

Geplaatst op 10 mei 2012 - 01:33

Je kan het extreme geluk hebben dat beide componenten van de suspensie oplossen in de loopvloeistof van een hplc. Bij iets als melk zou dat kunnen met een loopvloeistof als methanol, waar zowel het water als de vetten in oplossen - en met geluk niet permanent aan je kolom bijven plakken.

Maar als dat het geval is, is het altijd aan te raden om het sample eerst te verdunnen in de loopvloeistof zodat er met zekerheid een oplossing ontstaat. Als je dat niet doet is de kans groot dat je de kolom permanent ruineert.
Victory through technology

#5

pimmodenhollander1

    pimmodenhollander1


  • >100 berichten
  • 244 berichten
  • Validating

Geplaatst op 10 mei 2012 - 21:02

Gewoon de stelregel aanhouden dat je alleen gefiltreerde loopvloeistoffen EN samples toepast. En inderdaad zoals Benm zegt, altijd je laatste doorverdunning in je loopvloeistof maken. Dan zit je altijd goed.

#6

Benm

    Benm


  • >5k berichten
  • 8784 berichten
  • VIP

Geplaatst op 11 mei 2012 - 01:43

Samples flitreren gaat natuurlijk niet altijd - je loopt soms het risico dat de stof die je wilt onderzoeken blijft plakken aan het filter.. zeker bij kwantitatieve hplc is dat lastig.

Als je eraan twijfelt kun je altijd het sample in een fluorescentie spectrometer gooien (die meet onder 90 graden, ook verstrooing) om te zien of er daadwerkelijk sprake is van een oplossing.
Victory through technology

#7

Jooken

    Jooken


  • >250 berichten
  • 677 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 12 mei 2012 - 12:19

Bij analyse van melkstalen (of andere monsters van biologische oorsprong) MOET je bovendien letten op het volgende:
- injecteer GEEN vetten op je kolom. Die krijg je er nagenoeg niet af en ruïneren je kolom in de kortste keren. DUS: eerst de aanwezige vetten afcentrifugeren (bvb 12 min. bij 24000 g)
- injecteer GEEN proteïnen op je kolom. Die zullen neerslaan door het organisch solvent, met hetzelfde gevolg als hierboven. Proteïnen kan je eerst neerslaan met bvb trichloorazijnzuur of acetonotrile. Daaran afcentrifugeren.

Als je analyt vetoplosbaar is kan je problemen krijgen met de recovery. Dit moet je uiteraard afzonderlijk nagaan, met standaard additie.





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures