Springen naar inhoud

Analyse van een onbekend mengsel mbv een HPLC



  • Log in om te kunnen reageren

#1

Saifff

    Saifff


  • 0 - 25 berichten
  • 6 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 24 juni 2012 - 15:55

Ik ben bezig met me proef aan het uitwerken en ik snap een paar dingen niet helemaal.
Het mengsel bestond uit caffeine, codeine en paracetamol.
Nu heb ik de log p opgezocht van deze stoffen en die is als volgt:

Caffeïne : log p = -0.07
Codeïne : log p = 0,6
Paracetamol : log = 0,5

Wat zegt nou een min getal voor log?
En is het zo dat hoe hoger de waarde, hoe apolairder een stof dan is ? Want P = oplosbaarheid in apolaire stof / oplosbaarheid polaire stof

En ervan uitgaande dat deze log waardes kloppen, zou je dus na de analyse de eerste piek waarnemen van paracetamol, als tweede codeïne en als laatste caffeïne? Of zou je helemaal geen piek waarnemen van de codeïne omdat deze zo'n sterke interactie aangaat met de stationaire fase en niet van de kolom afkomt?

De stationaire fase bestaat uit silica deeltjes met C18-keten.
De mobiele fase bestaat uit 20% methanol en 80% water.

Als je naar de structuurformules kijkt dan lijkt codeïne het meest apolair en paracetamol het meest polair.

Klopt dit allemaal? Alvast bedankt voor de moeite.

Gr.

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Benm

    Benm


  • >5k berichten
  • 8780 berichten
  • VIP

Geplaatst op 25 juni 2012 - 00:46

Een negatief logaritme wil zeggen dat het getal waarvan dat het logartime is, kleiner is dan 1.

Bijvoorbeeld (base 10):

log (10) = 1
log (1) = 0
log (0.1) = -1

De verhouding in retentietijden zou volgens die getallen in de orde van 1, 3.2 en 4 moeten zijn, bovenop de tijd die het loopmiddel nodig heeft om door de gehele kolom te komen.
Victory through technology

#3

Saifff

    Saifff


  • 0 - 25 berichten
  • 6 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 25 juni 2012 - 08:28

Hoe kom je aan 1, 3,2 en 4?
En wat zou jij zeggen aan de hand van de log p?
Welke stof verlaat als eerste de kolom en welke als laatste?
En het belangrijkste is dus waarom dat dan gebeurd..

Alvast heel erg bedankt.

#4

Benm

    Benm


  • >5k berichten
  • 8780 berichten
  • VIP

Geplaatst op 25 juni 2012 - 12:19

10^0.6 = 3.2 enzovoorts.

p is een maat voor polariteit, waarbij een grote waarde een apolaire stof vertegenwoordigd.

In dit voorbeeld is je stationaire fase apolair en je loopmiddel polair. Hoewel dit de gebruikelijke situatie is, heet dat reverse-phase chromatografie. In dit geval zullen dus de meest polaire stoffen als eerste uit de kolom komen, dus eerst caffeine, dan paracetamol en als laatste codeine.

Doordat de p waardes redelijk dicht bij elkaar liggen kun je dit scheiden met een constant loopmiddel. Als de waardes verder uit elkaar liggen is het gebruikelijk om het loopmiddel geleidelijk te veranderen, bijvoorbeeld beginnend met 20% MeOH/H2O oplopend naar 100% MeOH. Zonder zo'n gradient zou het te lang duren om bijv een vetzuur weer van die kolom af te krijgen.
Victory through technology

#5

Jooken

    Jooken


  • >250 berichten
  • 677 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 25 juni 2012 - 20:25

De logP is het logaritme van de verdelingscoëfficiënt van de stof in octanol / water:
logP = log(Coctanol/Cwater) (met C: concentratie)

Dit betekent dat hoe groter logP is, hoe minder polair de stof is. In een RP HPLC systeem zal de meest polaire stof het meest lijken op de mobiele fase, en dus het eerst elueren. Ik zou dus verwachten dat caffeïne eerst elueert, dan codeïne en tenslotte paracetamol.
Let wel: polariteit is een zeer complex begrip, dat je nooit volledig kan beschrijven met één enkel cijfer. Door specifieke interacties met de mobiele fase kan een bepaalde component vertraagd of versneld worden, waardoor de elutievolgorde kan wijzigen. De enige manier om de pieken in het chromatogram ondubbelzinnig te identificeren, is door de zuivere standaarden één voor één te injecteren.

#6

Benm

    Benm


  • >5k berichten
  • 8780 berichten
  • VIP

Geplaatst op 25 juni 2012 - 22:54

Waarom baseer je dat codeine er eerder af komt dan paracetamol? 0.5 en 0.6 scheelt elkaar niet veel, maar als die p waardes correct zijn zie ik geen reden om aan te nemen dat de volgorde anders is dan cafeine-paracetamol-codeine.
Victory through technology

#7

Marko

    Marko


  • >5k berichten
  • 8933 berichten
  • VIP

Geplaatst op 26 juni 2012 - 09:01

Welke stof verlaat als eerste de kolom en welke als laatste?
En het belangrijkste is dus waarom dat dan gebeurd..


In dat geval is het het belangrijkst dat je je boek eens openslaat. Je huiswerk moet je zelf doen.

Cetero censeo Senseo non esse bibendum


#8

Saifff

    Saifff


  • 0 - 25 berichten
  • 6 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 26 juni 2012 - 17:59

Ik begrijp het nu. Je zou verwachten dat paracetamol er als eerste uitkomt doordat deze het meest polair is. Nu is codeïne een speciaal molecuul. Deze stof heeft een tertiaire structuur waardoor die alsnog een interactie aan kan gaan met de stationaire fase. Normaal gaan stoffen geen interactie aan met de stationaire fase maar werkt het via de hydrofobe interactie model. De stoffen worden door de mobiele fase tegen de stationaire aan gedrukt doordat het energetisch voordeliger is. Codeïne zal zonder TEA (trimethylamine) niet zichtbaar zijn in het chromatogram vanwege zijn sterke interactie met de stationaire fase. En caffeïne kan als enige geen waterstofbruggen vormen waardoor deze het hardst tegen de stationaire fase wordt gedrukt. Hopelijk is het nu een beetje duidelijk.. Mochten er anderen mensen hiermee moeten werken.

Nu heb ik nog een vraag. De modifier is in dit geval methanol. En ik heb onderzoek gedaan dat naarmate er meer methanol zit in de mobiele fase, de mobiele fase visceuzer wordt waardoor de druk toe moet nemen om dezelfde debiet te behouden tot een methanol gehalte van 40%.

Nu is mijn vraag, waarom daalt de druk bij een methanolgehalte van minimaal 50% ? Je zou verwachten dat de mobiele fase visceuzer wordt, waardoor de druk dus zou blijven toenemen.

Iemand een verklaring hiervoor?

#9

Jooken

    Jooken


  • >250 berichten
  • 677 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 26 juni 2012 - 20:57

waarom daalt de druk bij een methanolgehalte van minimaal 50% ?

???
Naar mijn ervaring is de druk op een HPLC systeem wel degelijk maximaal bij 50 % methanol (Ik heb vaak genoeg gradiënten laten lopen van 5 tot 95% MeOH)






Also tagged with one or more of these keywords: scheikunde

0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures