Springen naar inhoud

flavanonen


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Hendrik_Jan

    Hendrik_Jan


  • 0 - 25 berichten
  • 7 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 27 juni 2012 - 18:37

Hallo allemaal,

Ik moet een bepaling gaan doen van hesperidine en naringine mbv HPLC
Ik heb een voorschrift gevonden, maar nu heb ik een paar vragen:

Waarom gebruik je een apolaire C18- kolom, want de stoffen zijn polair (alleen wel slecht oplosbaar in water)

De mobiele fase is acetonitril/ water/ azijnzuur 96% (200/800/0,5 v/v/v), waarom deze mobiele fase en waarom acetonitril en bijv geen methanol

Volgens de theorie is de optimale golflengte +/- 280 nm, kan dit uit de structuur van de stoffen worden afgeleid?

Alvast bedankt voor de reacties

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

soepkip88

    soepkip88


  • >100 berichten
  • 226 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 27 juni 2012 - 20:15

280 nm is voornamelijk de absorptie van aromaten. Beide hebben aromaten in zich en zijn dus goed zichtbaar. Is een zeer gangbare golflengte voor eiwitten met aminozuren met aromaten in zich.

Over het gebruik van de kolom, dat is niet direct zo te zeggen. Vaak is het ook maar net welke kolom er voor handen is. De scheiding zal ook wel op andere kolommen kunnen. Over de loopvloeistof geldt eigenlijk hetzelfde. Acetonitril is natuurlijk en aprotiotisch en iets polairder dan acetonitril.

Als je bij golflengtes rond de 200 nm zit kies je normaal voor acetonitril, omdat methanol een hogere (achtergrond)absorptie heeft. Ik zie vaak dat de piekjes mooier zijn met acetonitril dan met methanol, maar ik weet niet of dat altijd zo is, of alleen voor mijn type componenten.
Als het niets uitmaakt zou ik voor methanol gaan, dat is goedkoper.. en dan heb je ook niet zo snel last van polymerisatieproducten als de kolom te lang niet gebruikt wordt.

#3

Hendrik_Jan

    Hendrik_Jan


  • 0 - 25 berichten
  • 7 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 03 juli 2012 - 14:36

Ik heb nog een paar vragen:

De stoffen worden opgelost in DMF en vervolgens aangevuld met azijnzuur 0,01M. Heeft dit invloed op de stoffen of iets anders?

Ammnoiumoxalaat zorgt voor stabiliteit van de stoffen, maar ik kan niet goed verklaren wat het precies met het component doet

Alvast bedankt

#4

Jooken

    Jooken


  • >250 berichten
  • 677 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 05 juli 2012 - 18:54

Beide componten bevatten licht zure fenolische OH groepen. Het azijnzuur dient om de ionisatie te onderdrukken, zodat ze beter interageren met de apolaire stationaire fase.

Vanwaar komt dat ammoniumoxalaat?

#5

Hendrik_Jan

    Hendrik_Jan


  • 0 - 25 berichten
  • 7 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 05 juli 2012 - 19:53

Ammoniumoxalaat wordt toegevoegd aan de monsters en omdat de area's standaarden zeer instabiel waren heb ik geprobeerd ammniumoxalaat toe te voegen en daardoor werden ze stabieler

#6

Hendrik_Jan

    Hendrik_Jan


  • 0 - 25 berichten
  • 7 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 09 juli 2012 - 17:33

Hallo allemaal,

Ik heb een vraag over hesperidine en naringine

Deze zijn slecht oplosbaar in water, maar goed in DMF, hoe is dat te verklaren omdat het polaire stoffen zijn

Nadat het opgelost is in DMF wordt azijnzuur 0,01M toegevoegd. Heeft dit invloed op het component of kan het ook gewoon demi- water zijn

Voor de stabiliteit wordt ammoniumoxalaat toegevoegd, hoe is dit te verklaren mbt de componenten

Bedankt voor de reacties

#7

Typhoner

    Typhoner


  • >1k berichten
  • 2446 berichten
  • VIP

Geplaatst op 09 juli 2012 - 20:39

Oplosbaarheid in water is iets minder eenvoudig dan polariteit alleen: het is een afweging van allerlei factoren: dipoolmomenten, waterstofbruggen die kunnen worden gevormd, en het aandeel hydrofobe stukken (zoals de benzeenring).
This is weird as hell. I approve.

#8

Marko

    Marko


  • >5k berichten
  • 8937 berichten
  • VIP

Geplaatst op 10 juli 2012 - 12:48

Daarbij, water is geen handig referentiepunt waar het om polariteit gaat. Inderdaad, water is polair, maar water is heel erg polair.

Een belangrijk verschil tussen water en DMF is ook dat DMF-moleculen onderling geen waterstofbruggen aan kunnen gaan, maar wel goed in staat zijn om waterstofbruggen te accepteren. Een molecuul hesperidine of naringine kan dus bij oplossen in DMF een groot aantal waterstofbruggen aangaan, dat molecuul bij oplossen in water "de concurrentie moet aangaan" met watermoleculen, die óók graag hun waterstofbruggen willen doneren.

Cetero censeo Senseo non esse bibendum


#9

Hendrik_Jan

    Hendrik_Jan


  • 0 - 25 berichten
  • 7 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 11 juli 2012 - 15:29

Bedankt voor de reacties

Iemand nog een idee over de ammoniumoxalaat als stabilisator?

#10

Hendrik_Jan

    Hendrik_Jan


  • 0 - 25 berichten
  • 7 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 13 juli 2012 - 15:30

Nu wil ik hesperidine en naringine gaan analyseren op mbv HPLC

Voor welke kolom/ mobiele fase zou ik het best kunnen kiezen en waarom, in een voorschrift staat een apolaire C18
De mobiele fase is Acetonitril/ water/ azijnzuur 200/800/0,5 v/v/v

Alvast bedankt voor de reacties

#11

Hendrik_Jan

    Hendrik_Jan


  • 0 - 25 berichten
  • 7 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 13 juli 2012 - 16:09

Hallo,

Hoe kan ik bij een C18- kolom met RP HPLC bepalen welke stof het eerste van de kolom af komt zonder dat ik een analyse gedaan heb

Bedankt

#12

Marko

    Marko


  • >5k berichten
  • 8937 berichten
  • VIP

Geplaatst op 13 juli 2012 - 21:19

Theorieboek erop naslaan en de stofeigenschappen opzoeken.

[mod]Alle onderwerpen over hesperidine en naringine en de bepaling met HPLC samengevoegd. In het vervolg a.u.b. alles in 1 topic houden.[/mod]

Cetero censeo Senseo non esse bibendum


#13

Jooken

    Jooken


  • >250 berichten
  • 677 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 18 juli 2012 - 14:44

Hoe kan ik bij een C18- kolom met RP HPLC bepalen welke stof het eerste van de kolom af komt zonder dat ik een analyse gedaan heb


Dat is onmogelijk! In principe komt de meest polaire het eerst uit de kolom, maar "polariteit" is een veelomvattend begrip dat niet in één getalletje te vangen is.

Zoek analyses van die componenten op in de literatuur, en als jij dezelfde kolom en mobiele fase gebruikt, ken je de elutievolgorde. Anders moet je standaarden injecteren.





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures