HPLC pieken
Moderator: ArcherBarry
HPLC pieken
Hallo,
Ik heb vaak een piek naar beneden in het begin van de analyse.
Het is niet altijd mijn eerste piek, er komen 3-4 pieken op 1 minuut in het begin van mijn analyse en daartussen zit dan een piek naar beneden, ofwel komt de piek naar beneden voor deze 3-4 pieken.
Enig idee wat het zou kunnen zijn? Een geïnjecteerde luchtbel, of een luchtbel aanwezig in de kolom (want hij komt op elk chromatogram terug)?
Ik heb vaak een piek naar beneden in het begin van de analyse.
Het is niet altijd mijn eerste piek, er komen 3-4 pieken op 1 minuut in het begin van mijn analyse en daartussen zit dan een piek naar beneden, ofwel komt de piek naar beneden voor deze 3-4 pieken.
Enig idee wat het zou kunnen zijn? Een geïnjecteerde luchtbel, of een luchtbel aanwezig in de kolom (want hij komt op elk chromatogram terug)?
- Berichten: 11.177
Re: HPLC pieken
Los jij je monster op in je eluens of niet? Als je dat niet doet, absorbeert je mobiele fase even anders als de samenstelling bijvoorbeeld door een beetje oplosmiddel verandert.
-
- Berichten: 244
Re: HPLC pieken
Klopt, dit komt normaliter door je oplosmiddel. Ook je oplosmiddel absorbeert in bepaalde mate UV straling, net als je eluens. Als je mobiele fase dan verschillend is van je oplosmiddel (monster oplossen in 100% ACN en eluens ACN/water 50/50 bijvoorbeeld), krijg je dit fenomeen.
Re: HPLC pieken
Mijn buffer is acetornitrille en fosfaatbuffer pH 3. Maar mijn stalen zijn opgelost in acetonitrille en milli Q maaar de verhouding is nog steeds dezelfde.
Dit kan dus de oorzaak zijn?
Merci voor jullie antwoorden!!!
Dit kan dus de oorzaak zijn?
Merci voor jullie antwoorden!!!
- Berichten: 11.177
Re: HPLC pieken
Dat kan de oorzaak dus zijn. Je oplosmiddel bevat geen fosfaatbuffer als ik het goed lees.
-
- Berichten: 12.262
Re: HPLC pieken
Inderdaad, om dit te voorkomen dien je je samples te injecteren opgelost in het loopmiddel, zonder enige andere stoffen daarin (afgezien wat je wilt onderzoeken).
An sich is het overigens helemaal geen vreemd fenomeen: als je loopmiddel een gradient vormt is het lastig te zeggen op welk moment het oplosmiddel van je sample door de detector komt. Vaak is dat ver voor je sample en uitgesmeerd over een heel brede piek waardoor het nauwelijks opvalt, maar soms kan het wel een dip geven die voorijlt op de piek van je sample.
Niets om je druk over te maken verder - als je retentietijden wilt bepalen meet je gewoon de top van de piek van je sample (die als het goed is vrij scherp is) en kun je een beetje verloop door ongelijke oplosmiddellen negeren.
An sich is het overigens helemaal geen vreemd fenomeen: als je loopmiddel een gradient vormt is het lastig te zeggen op welk moment het oplosmiddel van je sample door de detector komt. Vaak is dat ver voor je sample en uitgesmeerd over een heel brede piek waardoor het nauwelijks opvalt, maar soms kan het wel een dip geven die voorijlt op de piek van je sample.
Niets om je druk over te maken verder - als je retentietijden wilt bepalen meet je gewoon de top van de piek van je sample (die als het goed is vrij scherp is) en kun je een beetje verloop door ongelijke oplosmiddellen negeren.
Victory through technology
-
- Berichten: 244
Re: HPLC pieken
En die fosfaatbuffer bevat een component die zomaar UV kan absorberen, namelijk de fosfaatcomponenten! Dus nee, helemaal geen vreemd fenomeen.