Springen naar inhoud

HPLC raadsel ivm concentratiebepaling


  • Log in om te kunnen reageren

#1

*_gast_Lenus_*

  • Gast

Geplaatst op 17 oktober 2012 - 20:44

Ik zoek een verklaring voor de volgende rariteit:

Ik heb product X, dit product X heeft een aantal afbraak producten die na een bepaalde tijd onvermijdelijk aanwezig zullen zijn.
Om afbraak te vermijden (eerder uit te stellen) wordt er slechts net voor injectie een oplossing van de product gemaakt.
Deze oplossing wordt dan in een oplossing gelijkaardig aan de mobiele fase (acetonitrille/milli Q in plaats van acetonitrille/fosfaatbuffer pH 3) verdunt en geïnjecteerd.

Ik heb 2 maal, kort na elkaar geinjecteerd: (en nu mijn probleem)

Bij mijn eerste injectie:

- Bekom ik een lagere concentratie (bepaal via standaardreeks) aan product X dan bij mijn 2de injectie. (Zelfs een concentratie die lager ligt dan wanneer ik een uur later injecteer en heb product al lichtjes gedegradeerd zou moeten zijn)

- Ook verschijnt er een extra piek, noem het product Y (die mogelijks afkomstig is van een degradatieproduct) die niet bij de 2de injectie verschijnt. (wel zeer klein)

Mijn vraag:

Bij de eerste injectie werd er niet geschud met het staal en de 2de wel.
=> Kan er een 'ontmenging' ontstaan tussen acetonitrille en milliQ met een verkeerde hoeveelheid product X tijdens de injectie tot gevolg (staal werd heel vanboven in de maatkolf genomen). En dat hierdoor de concentratie aan product Y detecteerbaar is.

Alvast merci om tot hier te lezen :)

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

pimmodenhollander1

    pimmodenhollander1


  • >100 berichten
  • 244 berichten
  • Validating

Geplaatst op 18 oktober 2012 - 10:54

Nee, als jij gewoon netjes gehomogeniseerd hebt zal dat niet gebeuren. ACN en water zijn volledig mengbaar.

#3

*_gast_Lenus_*

  • Gast

Geplaatst op 18 oktober 2012 - 20:15

Kunnen volgende verklaringen voor de extra piek mogelijk zijn.

Er werd bij 220 nm gemeten. Kunnen onzuiverheden in de mobiele fase sporadisch verschijnen op het chromatogram?
Of doordat sommige maatkolven onvoldoende met milliQ werden uitgewassen het mogelijk is om onzuiverheden uit gedestilleerd water detecteerbaar zijn?

Kan een oude C18 kolom 'stukjes' afgeven die (sporadisch) gedetecteerd kunnen worden?

Sorry voor mijn slecht taalgebruik. Ik had beter mijn vorige post nagelezen voor ik op Plaatsen klikte.

#4

pimmodenhollander1

    pimmodenhollander1


  • >100 berichten
  • 244 berichten
  • Validating

Geplaatst op 18 oktober 2012 - 20:38

Het deel van de extra piek kan ontstaan doordat je niet schoon hebt gewerkt, absoluut. Een beetje vuil van een eerdere analyse kan dan een extra piek opleveren.

Ik geloof niet in je verhaal van de mobiele fase, want die detecteer je continu dus een verhoging daarin zie je niet terug als een piek.

Oplossing zou kunnen zijn, kolfjes heel goed schoonmaken (of weggooien en volledig nieuwe gebruiken :)) en je metingen nog eens doen. Zie je het dan weer, dan ligt het ergens anders aan.

Gebruik je trouwens isocratische elutie of gradient?

#5

druipertje

    druipertje


  • >250 berichten
  • 374 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 18 oktober 2012 - 21:03

Ik geloof niet in je verhaal van de mobiele fase, want die detecteer je continu dus een verhoging daarin zie je niet terug als een piek.


Dat kan natuurlijk wel degelijk als gebruik wordt gemaakt van een gradient in de loopvloeistof. Net als dat bij bv een gc wel eens gebeurt, dat een stof blijft plakken op de kolom en pas bij hoge temp eraf komt. Als je dan niet lang genoeg laat lopen voor je de 2e run start dan komt die wel degelijk de 2e run mee wanneer de temp wordt verhoogt (of op hplc de loopvloeistof (a)polairder wordt gemaakt

#6

pimmodenhollander1

    pimmodenhollander1


  • >100 berichten
  • 244 berichten
  • Validating

Geplaatst op 19 oktober 2012 - 19:21

Ik doelde meer op een vervuiling in de mobiele fase... Dat die voor een algehele verhoging zorgt, ook bij gradient elutie. Dit vroeg de topicstarter ook.

Wat je verder zegt druipertje, mee eens.

#7

*_gast_Lenus_*

  • Gast

Geplaatst op 23 oktober 2012 - 12:28

Ik heb met een isocratische eluties gewerkt.

Merci voor alle uitleg. 'k Ben weer wat wijzer geworden, maar ik denk dat ik nooit zal weten wat juist de oorzaak was.





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures