Springen naar inhoud

buffers van de Qiagen-procedure


  • Log in om te kunnen reageren

#1

redflower0kirsten

    redflower0kirsten


  • 0 - 25 berichten
  • 9 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 25 oktober 2012 - 10:44

he,
voor een verslag van biotechnologie moet ik het hebben over de Qiagen-procedure. Nu vroeg ik me af waarvoor precies de buffers voor dienen. Ik weet dat er een bijzit voor de PH te verhogen en een om de PH te verlagen maar de rest ben ik vergeten.
kan iemand mij helpen?
alvast bedankt !

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

WendyTje

    WendyTje


  • >250 berichten
  • 773 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 25 oktober 2012 - 13:09

Ik weet niet precies wat je bedoelt met "de qiagen procedure" want qiagen heeft erg veel kits die allemaal werken met kolommen en buffers. Uiteraard verschilt het dus een beetje per kit, en ook per buffer. Je hebt bijvoorbeeld in de meeste kits wel een eqilibratie buffer, wasbuffers, elutiebuffers (daarbij gaat het ook om ethanol- en water gehaltes, zeker niet alleen pH) maar in veel kits heb je ook nog lysis buffers om maar iets te noemen.
Als je niet begrijpt waar de buffers voor zijn begrijp je de hele procedure niet dus als je een verslag moet maken is het vast verstandig om er zelf nog even in te duiken.
Anders moet je iets duidelijker zijn in wat je precies wilt weten, dit klinkt nu een klein beetje als: "Doe de opdracht even voor me"
To boldly go where I`ve never been before

Be nice to nerds, chances are you`ll end up working for one

#3

redflower0kirsten

    redflower0kirsten


  • 0 - 25 berichten
  • 9 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 03 november 2012 - 14:40

waarvoor dient de P1 buffer ? (er sta bij resuspensie maar wat betekend dit nu juist )
alle buffers die ik gebruik zijn
P1
P2
N3
PB
PE
dank je !

#4

Sjitty

    Sjitty


  • >250 berichten
  • 320 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 03 november 2012 - 23:46

Kan je ons misschien de volledige naam van de Kit geven en waarvoor je het precies gebruikt?

Resuspensie buffer dient normaal om cellpellet her op te lossen (na centrifugatie bijvoorbeeld).

#5

redflower0kirsten

    redflower0kirsten


  • 0 - 25 berichten
  • 9 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 05 november 2012 - 20:58

Kan je ons misschien de volledige naam van de Kit geven en waarvoor je het precies gebruikt?

Resuspensie buffer dient normaal om cellpellet her op te lossen (na centrifugatie bijvoorbeeld).


die ken ik zelf niet ik weet enkel welke buffers ik moest gebruiken en in welke volgorde.

#6

Sjitty

    Sjitty


  • >250 berichten
  • 320 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 05 november 2012 - 23:22

Was het een kit voor DNA opzuivering uit cellen?

Wat was je start materiaal en wat ben je bekomen?

#7

redflower0kirsten

    redflower0kirsten


  • 0 - 25 berichten
  • 9 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 10 november 2012 - 09:59

Was het een kit voor DNA opzuivering uit cellen?

Wat was je start materiaal en wat ben je bekomen?

we zijn gestart met E. Coli
sorry voor het late antwoord, ik zat zonder internet

#8

Kravitz

    Kravitz


  • >1k berichten
  • 4042 berichten
  • Moderator

Geplaatst op 10 november 2012 - 11:43

Opmerking moderator :

@redflower0kirsten: Op deze manier komen we nergens.

Zonder een exacte beschrijving van je experiment is het voor een buitenstaander onmogelijk hier ook maar iets zinnigs over te zeggen. Qiagen is een internationaal bedrijf met duizenden procedures waarvoor duizenden verschillende buffers worden gebruikt.

Beschrijf a.u.b. je experiment, met alle details, waarschijnlijk kan dan iemand je helpen.
"Success is the ability to go from one failure to another with no loss of enthusiasm" - Winston Churchill

#9

Sjitty

    Sjitty


  • >250 berichten
  • 320 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 10 november 2012 - 11:48

Ik vermoed dat het de bedoeling was om( plasmide) DNA te zuiveren uit E. Coli met een van de DNA prep kits. Meestal begin je met het opgroeien van je cultuur (hier E. Coli) waarrna het medium als supernatans verwijderd wordt via centrifugatie. De overblijvende pellet wordt dan eers heropgelost in resuspensiebufffer (P1), gelyseerd met lysebuffer (P2), geneutraliseerd met neutralisattiebuffer (N3) debris verwijderd met door centrifugatie, supernatans op 'een filterkolom gebracht, gewassen met wasbuffer (PB, B voor binding omdat deze bufer nog ethanol bevat zodat DNA op de filter gebonden blijft), en vervolgens geëlueerd met nucleasefree water (NE, E voor elutie) zonder ethanol, zodat het DNA nu opgevangen wordt in het epje.

Hopelijke herinner je je deprocedure een beetje zodat je zelf weet of dit de juiste is. De procedure kan veschillen naar gelang de hoeveelheid cultuur/DNA je wil gebruiken/bekomen (minPrep,midiPrep,megaPrep,gigaPrep).

#10

redflower0kirsten

    redflower0kirsten


  • 0 - 25 berichten
  • 9 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 10 november 2012 - 14:54

Ik vermoed dat het de bedoeling was om( plasmide) DNA te zuiveren uit E. Coli met een van de DNA prep kits. Meestal begin je met het opgroeien van je cultuur (hier E. Coli) waarrna het medium als supernatans verwijderd wordt via centrifugatie. De overblijvende pellet wordt dan eers heropgelost in resuspensiebufffer (P1), gelyseerd met lysebuffer (P2), geneutraliseerd met neutralisattiebuffer (N3) debris verwijderd met door centrifugatie, supernatans op 'een filterkolom gebracht, gewassen met wasbuffer (PB, B voor binding omdat deze bufer nog ethanol bevat zodat DNA op de filter gebonden blijft), en vervolgens geëlueerd met nucleasefree water (NE, E voor elutie) zonder ethanol, zodat het DNA nu opgevangen wordt in het epje.

Hopelijke herinner je je deprocedure een beetje zodat je zelf weet of dit de juiste is. De procedure kan veschillen naar gelang de hoeveelheid cultuur/DNA je wil gebruiken/bekomen (minPrep,midiPrep,megaPrep,gigaPrep).

oke dank je hier ben ik al veel mee





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures