Springen naar inhoud

digereren van lambda DNA



  • Log in om te kunnen reageren

#1

redflower0kirsten

    redflower0kirsten


  • 0 - 25 berichten
  • 9 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 25 oktober 2012 - 12:29

he,
voor het vak biotechnologie moet ik een verslag maken over het digereren van het lambda DNA en fragment lengtes. Nu vroeg ik me af of iemand weet waarom het zo belangrijk is om het digest te maken in een bepaalde volgorde:
DNA
steriel gedestilleerd water
de gepaste buffer
(BSA)
restrictie-enzym

alvast bedankt !

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Kravitz

    Kravitz


  • >1k berichten
  • 4042 berichten
  • Moderator

Geplaatst op 25 oktober 2012 - 13:06

De volgorde zoals die daar staat is niet van uiterst belang, wat wél belangrijk is is dat je het enzym pas als laatste aan je digest toevoegt.

De reden waarom dat zo is is omdat enzymen uiterst gevoelige eiwitten zijn. Wanneer je ze optimaal wil laten functioneren zorg je ervoor dat ze in een optimaal medium terecht komen.

Restrictie-enzymes die je krijgt van de leverancier zitten vaak opgelost in een buffer met 50% glycerol. Om deze echter goed te laten functioneren mag de hoeveelheid glycerol maximaal 10% van het totale reactievolume bedragen. Dat is de reden waarom je extra water aan je reactiemengsel gaat toevoegen en niet zomaar je enzym bij je DNA gaat 'gooien'.

Verder vereisen sommige enzymen een stabiliserende BSA buffer, terwijl andere dat niet nodig hebben. Dat is iets enzym-specifiek.

Slechte, niet-standaard condities kunnen de specificiteit van de gebruikte restrictie-enzymes sterk omlaag trekken.

Een voorbeeldje:

EcoRI splits normaal G'AATTC

EcoRI onder niet optimale condities splits alle N'AATTN

"Success is the ability to go from one failure to another with no loss of enthusiasm" - Winston Churchill

#3

WendyTje

    WendyTje


  • >250 berichten
  • 773 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 25 oktober 2012 - 13:55

Nog een opmerking: ik denk dat je digesteren bedoelt, van restrictie digest, niet digereren, dat woord bestaat volgens mij niet.
To boldly go where I`ve never been before

Be nice to nerds, chances are you`ll end up working for one

#4

redflower0kirsten

    redflower0kirsten


  • 0 - 25 berichten
  • 9 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 25 oktober 2012 - 14:57

oke dank je hier heb ik al veel aan !

#5

Marko

    Marko


  • >5k berichten
  • 8933 berichten
  • VIP

Geplaatst op 25 oktober 2012 - 22:26

Digereren is een correcte term.

Cetero censeo Senseo non esse bibendum


#6

WendyTje

    WendyTje


  • >250 berichten
  • 773 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 26 oktober 2012 - 07:41

@ Marko: Echt waar? Oh, oke! Sta al jaren in het lab maar nog nooit van het woord gehoord! typisch nederlandse term misschien? Kan het me ook niet herinneren van school. Maakt verder ook niet uit, ben wel verbaast dat ik er nog nooit van heb gehoord.
I stand corrected :o
To boldly go where I`ve never been before

Be nice to nerds, chances are you`ll end up working for one






Also tagged with one or more of these keywords: biologie

0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures