Springen naar inhoud

Hulp nodig bij miRNA-ISH met Cy5 geconjugeerde TSA amplificatie!


  • Dit onderwerp is gesloten Dit onderwerp is gesloten

#1

Natural.Science

    Natural.Science


  • >25 berichten
  • 36 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 29 november 2012 - 16:07

Het bericht staat in het engels, maar antwoorden kan in het Nederlands.

Hello,

I am working with an Exiqon miCURY LNA microRNA ISH kit tot stain some types of miRNA in cardiac mouse tissue sections (parrafine).

The ISH procedure works splendid! The probes are DIG labeled and when I amplify it immunohistochemically with αDIG-AP and then use NBT-BCIP I see perfect staining in my positive controls and no staining at al in my negative controls. Exactly how it should look like and really clear.

When I try to amplify this ISH fluorescent it goes wrong... I cant get any signal at all.

I use a PerkinElmer TSA PLUS Fluorescence kit tot amplify my signal. I have used FITS labeld TSA and Cy5 labaled TSA, both give me no result on the ISH. But the TSA works perfect! When I use TSA in respons on another staining with HRP conjugated secondary Ab's, this give me perfect results as well.

So you would expect there is something wrong with my αDIG-HRP Ab's (Roche).... but they are brand new and work fine in other reactions.

Where can it go wrong? :(

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Mako

    Mako


  • >1k berichten
  • 1146 berichten
  • VIP

Geplaatst op 29 november 2012 - 22:51

[mod]Wetenschapsforum is een Nederlandstalig forum. Daarom verwachten we ook elke vorm van communicatie in het Nederlands gebeurt. Je bent perfect welkom met je vraag, maar vertaal deze dan even en plaats ze opnieuw in het Biologieforum ;).[/mod]
A word of encouragement during a failure is worth more than an hour of praise after success.
I hear, I know. I see, I remember. I do, I understand -Confucius-





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures