Springen naar inhoud

Suikerbepaling HPLC/UPLC


  • Log in om te kunnen reageren

#1

steebTASTIC

    steebTASTIC


  • 0 - 25 berichten
  • 3 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 26 juni 2013 - 08:36

Hallo,

Ik ben een laatste jaars HBO analytische chemie student. Tijdens mijn stage ga ik mij bezig houden met het bepalen van suikers door middel van HPLC. De specifieke suikers die ik ga meten zijn: Sucrose, Maltose, Maltotriose, glucose & fructose in een erg complexe matrix. Er is een groot probleem. Sucrose en maltose coelueren. Er wordt momenteel gebruik gemaakt van een HPLC systeem met een RI detector (isocratisch), maar mijn taak is om deze analyse over te zetten op een UPLC systeem met een ELSD detector (gradient). Ik ben nog niet aan mijn onderzoek begonnen maar ik ben literatuur aan het verzamelen wat mij een inzicht kan geven welke handelingen relevant kunnen zijn voor mijn onderzoek. Heeft iemand ervaring met deze technieken (en vooral het uitelkaartrekken van verschillende disachariden), of weet iemand goede artikelen/websites waar ik hier informatie over kan vinden.
Zelf heb ik op internet gevonden dat maltose reducerend is, en sucrose niet. Kan door deze eigenschap maltose modificeren, zodat het zal verschuiven in mijn chromatogram, maar nog steeds kwantitatief te meten is?

Groet, Stefan

Veranderd door steebTASTIC, 26 juni 2013 - 08:38


Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

keyzplayer

    keyzplayer


  • >100 berichten
  • 115 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 26 juni 2013 - 10:59

Door een gradient te gebruiken kun je meestal al wat pieken uit elkaar trekken.

#3

kaadeekaa

    kaadeekaa


  • >25 berichten
  • 58 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 15 augustus 2013 - 22:28

Het beste kijk je eens naar een paar voorbeelden van scheidingen via ELSD (ik hoop dat je het principe reeds kent? ). Zoals keyzplayer reeds aanhaalde, kan je met een gradient wat pieken uit elkaar trekken, maar het begint natuurlijk wel bij een goeie scheidingskolom. De website van Sedere is een goeie bron als je wat te weten wil komen over ELSD : www.sedere.com
De scheiding tussen maltose en sucrose vind je er echter niet op terug.

Het feit dat er momenteel geen scheiding kan bekomen worden tussen sucrose en maltose, heeft gewoon te maken met een slechte keuze in kolom.

Volgende link laat ongeveer alle suikers zien die je moet scheiden :
http://www.shodex.co...h/dc030212.html, een heel eenvoudige isocratische scheiding met RI .

Uit eigen ervaring is dit een heel goeie manier van scheiden, via het HILIC principe. Ik vermoed dat jullie momenteel een pure suikerkolom gebruiken met ligand uitwisseling en size exclusion, maar dat is een methode uit de jaren 80-90.

Die link hierboven van shodex geeft nog wel wat meer info. Gewoon klikken op de suiker die je wil en je ziet alle links naar methodes die voor deze component is opgesteld door hen. Vaak zitten de andere suikers die je opnoemt er ook bij.

Als je toch UHPLC gaat uittesten, kan je best kijken naar NH2 of HILIC-kolommen met deeltjesgrootte van 3 um of kleiner. Ik weet niet of die bestaan. Anders heb je nog de keuze om naar shellcore kolommen te grijpen om je methode zo kort mogelijk te maken. Poroshell van Agilent of Accucore van Thermo zijn bij de betere.

Veranderd door kaadeekaa, 15 augustus 2013 - 22:39

chromblog.wordpress.com

#4

Lemanr

    Lemanr


  • 0 - 25 berichten
  • 1 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 17 april 2014 - 15:44

@ Stefan

 

Ben met een gelijkaardig onderwerp bezig en ben uiteraard benieuwd naar uw resultaten. 

Is er enige info die u wenst te delen betreffende keuze van het systeem en werkomstandigheden? Welke detectorkeuze draagt uw voorkeur: RI of ELSD?

Welk type UPLC kolom is getest geweest? UPLC systeem is van Waters of Agilent?

Werd er ook rekening gehouden met de elutie van polyolen?

 

Kortom, alle info is welkom en zou de tijdrovende zoektocht kunnen inkorten.

 






0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures