Springen naar inhoud

Bepaling van gehalte aan tocoferolen (vitamine E) in monsters adhv UPLC


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Babet

    Babet


  • 0 - 25 berichten
  • 5 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 03 augustus 2013 - 15:35

Ik heb bij de verwerking van mijn resultaten voor mijn thesis een vraag. Ik maak gebruik van een extractiemethode en detectie met UPLC. Adhv de detectie weet ik hoeveel tocoferolen aanwezig zijn in mijn injectie (in µg/mL). Mijn injectie is een geëxtraheerd resultaat van mijn oorspronkelijk monster. Ook mijn kalibratiecurve werd opgemaakt in µg/mL. Nu zou ik te weten moeten komen hoeveel µg/g tocoferolen er in mijn monster zaten. Ik nam telkens 5g monster, afgewogen op een analytische weegschaal.

Met andere woorden, ik zou mijn geïnjecteerde concentratie in µg/mL (weet ik door detectie, chromatogrammen en regressievergelijking) moeten omrekenen in µg/g (zoals in literatuur weergegeven), wetende dat ik telkens 5g monster gebruikte. Voor mijn kalibratiecurve startte ik van een standaardoplossing van 1mg/mL en heb ik verschillende concentraties geïnjecteerd (0,5; 1; 2,5; 4; 5 en 7,5 µg/mL).

Kan iemand mij met deze vraag helpen?

Babette

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Babet

    Babet


  • 0 - 25 berichten
  • 5 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 03 augustus 2013 - 15:44

Ik ben zelf ondertussen op een eventueel antwoord gekomen. Zou dit kunnen correct zijn?

Ik injecteerde een volume van 100 µL, waarin mijn geëxtraheerde tocoferolen opgelost waren. Als dit bv uitgerekend volgens de regressievergelijking 0,15 µg/mL tocoferolen bevatte, dan wil dit zeggen dat mijn geïnjecteerde oplossing een concentratie had van 0,015 µg tocoferolen per 100µL oplossing. Dit is het resultaat van 5g monster, dus in 1g monster zit 0,003 µg/g (0,015 gedeeld door 5).

Is dit een correcte denkwijze?

Babette

#3

rwwh

    rwwh


  • >5k berichten
  • 6847 berichten
  • Moderator

Geplaatst op 05 augustus 2013 - 15:17

Ik kan je rekenwijze niet helemaal volgen. Zitten alle geŽxtraheerde tocoferolen in die 100 microliter? Of heb je daar ook nog een monstertje genomen van het geheel?

Volgens mij kun je het best rekenen met hoeveelheden in plaats van concentraties. Hoeveel zat er in je ingespoten hoeveelheid? Reken dat terug naar je hele extract, je hele monster etc. Pas op het laatste moment reken je om naar een concentratie. Misschien nog een beter alternatief is om een ijkmeting te doen aan een bekend monster dat heel veel lijkt op je echte monster; dan neem je ook de extractie-efficiŽntie in aanmerking.

#4

Babet

    Babet


  • 0 - 25 berichten
  • 5 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 05 augustus 2013 - 17:36

Het is eigelijk nog veel complexer dan dat achteraf gezien. Ik begrijp echt niet meer hoe ik mijn gehalte dat ik bekom in µg/mL (dat volgt uit de regressievergelijking van mijn kalibratiecurve) omzet naar een gehalte vanuit mijn monster.

Ik nam 5g monster en voegde hierbij in totaal 5 mL extractiesolvent (2,5 mL ethylacetaat + 2,5 mL n-hexaan). Dit werd geschud en gecentrifugeerd. Van het supernatans nam ik 1,5 mL dat ik in mijn clean-up tube deed (waar bepaalde zouten in aanwezig waren). Dit werd nog eens geschud en gecentrifugeerd. Van dit supernatans nam ik 700 µL, filtreerde dit en droogde dit met stikstof. Op deze droge massa deed ik 100 µL mobiele fase. Het geheel werd gevortext en werd geïnjecteerd in de UPLC.

Mijn resultaat dat uit het chromatogram kwam, de piekoppervlakte dus, zette ik om via de regressievergelijking van de kalibratiecurve in µg/mL. Ik begrijp dat dit het gehalte/concentratie aan tocoferolen van de geïnjecteerde oplossing (100 µL mobiele fase met opgeloste tocoferolen). Maar hoe ik nu rekening moet houden met de verdunningen (1,5 mL en 700 µL) en het geheel kan omzetten naar mijn 5g monster is me niet meer duidelijk.

Alvast bedankt voor je antwoord.

#5

rwwh

    rwwh


  • >5k berichten
  • 6847 berichten
  • Moderator

Geplaatst op 05 augustus 2013 - 18:32

Elke keer als je maar een deel van je monster overneemt moet je eens uitrekenen welk deel dat is. Als je in een tiende deel van je monster 10 microgram hebt gevonden kun je zo terugrekenen hoeveel er in het geheel zit. Dit moet je voor alle stappen van achter naar voor doen.





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures