Springen naar inhoud

Primer phosphorylatie


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Theo22

    Theo22


  • >25 berichten
  • 74 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 25 september 2013 - 22:08

Er wordt altijd gezegd dat wanneer je primers phosphoryleerd met T4-PNK (bv om te kloneren), dat je deze primers maar gedurende een korte tijd kunt gebruiken omdat de fosfaat groep niet stabiel zou zijn.

Maar hoe zit het met primers die je gemodificeerd koopt, dus met de 5'-P er al aan. Zijn die ook instabiel of kan ik die primers wel onbeperkt gebruiken.

Heeft iemand hier ervaring mee?

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Colombo_inc2

    Colombo_inc2


  • 0 - 25 berichten
  • 13 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 29 september 2013 - 13:42

Hoi Theo,

Wanneer je primers besteld worden deze (bijna) altijd in gevriesdroogde vorm aangeleverd. Dit is een zeer stabiele manier van primers bewaren, er is geen water en ook nucleases kunnen niks doen.
Wanneer je de primers ontvangt los je ze op in nuclease-vrij water of een Tris EDTA oplossing (1xTE buffer). Beide zijn goed en voorkomen dat je primers degenereren.
Bewaar advies voor opgeloste primers is 4 graden voor korte tijd en -20 graden (vriezer) voor lange tijd.

Zelf doe ik T4 fosforylatie van primers altijd vlak voor gebruik van primers in kloneer reacties. Je hebt vaak genoeg primer om dit 100x te herhalen.

#3

Theo22

    Theo22


  • >25 berichten
  • 74 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 29 september 2013 - 22:50

Hallo Colombo,

Bedankt voor je antwoord. Helaas is dit niet wat ik bedoel. Afbraak van de primers is geen probleem bij mij. De lengte van de primers is op gel precies zoals verwacht.
Ik gebruik grote primers om 3D structuren te maken. Daarbij moeten primers ook aan elkaar geligeerd worden. Die stap werkt niet erg efficient meer. Vandaar mijn vraag hoe het zit met de stabiliteit van een 5'-phospho groep aan een enkelstrengs primer.
Hopenlijk heeft daar iemand ervaring mee.





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures