Oplosbaarheid calciumchloride in acetonitril

Lala

Hoi,

Ik werk op een research lab als analist. Momenteel hebben we wat problemen met het betrouwbaar kwantificeren van 1 van onze enzymen. Het is een enzym 3 calcium-binding domains. Als analyse methode prefereren wij reverse phase-HPLC. Bradford, pierce 660 en alle andere spectrofotometrische technieken zijn voor deze toepassing domweg niet nauwkeurig genoeg. RP-hplc heeft 1 groot probleem: carry over van de 1e run op de daaropvolgende. Om dit te minimaliseren zijn er verschillende mogelijkheden, waarvan de meest voor de hand liggende de eluent- en kolomkeuze zijn. We hebben een kolom die erg goed presteert bij erg veel enzymen, mbt tot scheiding, resolutie maar ook met een minimum aan carry over, echter niet voor ons enzym met 3 calcium-binding domains. 2 van die domains bevinden zich aan de oppervlakte. We willen het eluent zo aanpassen dat er altijd genoeg calcium inzit om die calciumionen aan die domeinen te laten zitten. Daarvoor willen we het dus toevoegen aan het eluens. Wij werken echter met gradienten, dus eluens A (miliq met 0.1% trifluoro-azijnzuur (TFA) en eluens B: acetonitril met 0.07% TFA, wordt in oplopende verhouding door de hplc gepompt. Nu willen we daar calciumchloride aan toevoegen: 1 mM moet voldoende zijn. Dat is geen probleem voor de MQ. Echter: wat is de oplosbaarheid van calciumchloride (al dan niet gehydrateerd) in acetonitril? Ik weet dat het niet best oplost, ik probeerde een 200 mM stock te maken: dat werkte niet. Voor ik een 110 mg in 1 L acetonitril gooi, wil ik wel weten of dat oplost. Zoniet, dan kunnen we nog overwegen om het alleen aan MQ toe te voegen, maar dan moet de calciumchloride niet acuut neerslaan zodra het met acetonitril in aanraking komt, want dan is mijn hplc heel erg stuk.

Google's eerste 5 pagina's wisten het me niet te vertellen...

Ik hoop 1 van jullie wel, en anders sowieso een leuk onderwerp.

Benm

Oplosbaarheid kan hier een lastig ding zijn: an sich kan het wel zo zijn dat 110 mg calciumchloride (of een ander calciumzout) op te lossen valt in acetonitril, maar of dat lukt door het er domweg in de gooien en te roeren is maar weer de vraag.

Wat je eens kunt proberen: maar een oplossing van pakweg 100g/l in milliQ, en breng die met een injectiespuitje langzaam in een bekerglaasje acetonitril terwijl je flink roert. Dat kun je evt met kleine volumes (10 of 100 ml) proberen om te zien of het opgelost blijft voordat je met een liter aan de slag gaat.

Uiteraard levert dit ook een beetje water in de acetonitril op, maar ik neem aan dat het geen watervrije opstelling is en een ml per liter oid geen probleem zal zijn?

Lala

Dank je, ik zal je suggestie proberen. Het eigenlijke probleem is al ondervangen door de enzymoplossing te bufferen met Tris, pH 7,4, met calciumchloride daaraan toegevoegd. Aangezien we 10 µl injecteren in 5% acetonitril in miliq loopvloeistof, zijn daar geen problemen mee. Zodra het molecuul interactie aangaat met het kolommateriaal, spoelt het restant aan calciumionen gewoon weg met die lage concentratie acetonitril en bij ongeveer 48% acetonitril, als de omgeving zo hydrofoob is dat het molecuul geen interactie meer aangaat met het kolommateriaal en er dus vanaf komt, zijn die 3 calciumionen per eiwitmolecuul veel liever bij dat molecuul dan in oplossing, dus zal het ook niet reageren met wat-dan-ook en eventueel neerslaan.

Wetenschapsforum

Laatste berichten

Nieuwsberichten

Oplosbaarheid calciumchloride in acetonitril

Oplosbaarheid calciumchloride in acetonitril

Re: Oplosbaarheid calciumchloride in acetonitril

Re: Oplosbaarheid calciumchloride in acetonitril