Hallo allemaal,
Ik snap iets niet goed aan de SOE (splicing by overlap extension) pcr.
Na een eerste PCR reactie, waarbij aan de 5' van de primers een staart wordt gekozen, krijgt men onder andere twee fragmenten, die aan de 5' kant een complementaire staart vertonen.
Deze twee fragmenten kunnen dus basenparen, maar dan moet een volledige ds DNA gemaakt worden met behulp van DNA polymerase. Aangezien deze in de 5'-->3' richting werkt, gaat dit volgens mij nog niet in deze stap, maar moet eerst nog een PCR optreden waarbij de twee speciale fragmenten met hun staart gekopieerd worden, zodat er nu dus ook twee fragmenten zijn met aan hun 3' kant een complementaire staart. Deze kunnen basenparen, DNA polymerase kan dan nucleotiden inbouwen en deze dubbelstreng kan dan geamplificeerd worden met een laatste PCR.
Nochtans vind ik overal dat je maar 1 PCR nodig hebt, dus dat het gedeelte dat ik in het rood heb aangeduid niet moet gebeuren. Kan iemand mij dit uitleggen?
Laatste berichten
-
22:54
Herleiden afmetingen vanaf een foto 12
-
18:53
Ik wil studeren via afstandsonderwijs, kennen jullie Tech?
-
18:09
Rotatie van het heelal 32
-
17:19
Ervaringen met "herontdekkingen" 12
-
18 apr
hall effect in vloeistof gebruiken als stromingssensor 6
-
18 apr
Gezocht: de/een naam voor een getallenrij met een cauchyrij als partieelsommenrij
-
18 apr
Casus uit de praktijk: positief test THC 18
-
17 apr
speciale rel. theorie 4
-
17 apr
Vreemde stank in huis 11
-
17 apr
3 vragen over mijn rooskleurige r.berekening H2netGekoppeldeHBrflowbatterij.
-
17 apr
Interpretatie reactie-energie 3
-
17 apr
Logistic equation (Pierre Verhulst,Belgian Mathematician) 5
-
16 apr
vB 9
-
15 apr
Kunnen quantum Zonnecellen 190% quantum efficiënt zijn 1
-
15 apr
Python: sockets sluiten 4
-
14 apr
Een eenvoudige logische redenering waarom tijd niet kan bestaan 'daarbuiten' 6
-
14 apr
Hoe kun je op quantumwijze getallen vinden in een rij die kleiner zijn dan getal k 3
-
13 apr
Documentenverdwijnen uit onedrive 1
-
12 apr
Behoud van impulsmoment en energie 5
-
12 apr
INLOG STORING / TIPS 4
Nieuwsberichten
-
04 mar
Een nieuw soort magnetisme: altermagnetisme
-
31 okt
AI kan via stem diabetes vaststellen 11
-
21 okt
Einstein krijgt wéér gelijk 45
-
07 feb
witter dan wit 20
-
19 jun
irrigatie en de aardas
SOE pcr
Moderator: ArcherBarry
-
- Berichten: 3.963
Re: SOE pcr
Ik snap niet precies waarom dat niet zou lukken.
(Bron: http://openwetware.org/wiki/PCR_Overlap_Extension)
Bij de Overlap-PCR kan je toch je primer designen tegen de restrictiesite (blauw) en dan gaat het polymerase toch over alles heen?
Finaal doe je wel best nog een extra (3de) PCR om alle fragmenten van restrictiesite tot restrictiesite te amplificeren zodat je het juiste fragment op gel kan isoleren.
(Bron: http://openwetware.org/wiki/PCR_Overlap_Extension)
Bij de Overlap-PCR kan je toch je primer designen tegen de restrictiesite (blauw) en dan gaat het polymerase toch over alles heen?
Finaal doe je wel best nog een extra (3de) PCR om alle fragmenten van restrictiesite tot restrictiesite te amplificeren zodat je het juiste fragment op gel kan isoleren.
"Success is the ability to go from one failure to another with no loss of enthusiasm" - Winston Churchill
-
- Berichten: 252
Re: SOE pcr
Ik ging er vanuit dat de eerste PCR maar uit 1 cyclus bestond, maar uiteraard gaat het hier om een 30tal cycli. In dat geval is er dus ook een complementaire staart aan de 3' kant en is mijn probleem opgelost!Kravitz schreef: ↑za 21 dec 2013, 10:07
Ik snap niet precies waarom dat niet zou lukken.
(Bron: http://openwetware.o...erlap_Extension)
Bij de Overlap-PCR kan je toch je primer designen tegen de restrictiesite (blauw) en dan gaat het polymerase toch over alles heen?
Finaal doe je wel best nog een extra (3de) PCR om alle fragmenten van restrictiesite tot restrictiesite te amplificeren zodat je het juiste fragment op gel kan isoleren.
Bedankt
