Tijdens het practicum voor mijn studie scheikunde hebben wij een mutatie van gfp en het wildtype met elkaar vergeleken door een uv-vis absorptie spectrum en twee fluorescentie spectra (480 en 280 nm). Het idee is dat wij hieruit de mutatie kunnen halen.
We hebben een aantal mogelijke mutaties gekregen. Ik heb op deze mutaties al flink gegoogled, maar desalniettemin kom ik er niet uit.
Tyr66 wordt His
Emissie naar lagere golflengte (blauw)--> niet waarschijnlijk
Ser202 wordt Phe en tegelijk ook Thr203 wordt Ile
Geeft minder excitatie bij 475 nm terwijl 395nm gelijk blijft (helaas niet gemeten bij excitatie met 395nm)
Ala206 wordt Lys
voorkomt dimerisatie, is dit bij gebruikte concentraties (rond ordegrootte 10^-6 M) eigenlijk wel mogelijk?
Ile167 wordt Thr
Ratio van excitatie gevoeligheid voor 395 en 475 draait om
Emmissie naar hogere golflengte (roder) -->niet waarschijnlijk
Relatieve fluorescentie tov wildtype bij 475 excitatie 188%
Op het oog leek het eluaat minder groen dan van het wildetype (iets geler misschien, maar vooral minder fel)
Ik heb het uv-vis en fluorescentie bij 480 nm spectrum bijgevoegd.
Ik vermoed dat de dubbele mutatie het meest waarschijnlijk is. De enige vraag hierbij is dan of als de gevoeligheid voor een bepaalde excitatie golflengte afneemt, de intensiteit van de fluorescentie dit ook doet.
- uv-vis.png (80.85 KiB) 111 keer bekeken
- excitatie 480.png (348.32 KiB) 111 keer bekeken
Alvast heel erg bedankt!
