Springen naar inhoud

Green fluorescent protein mutaties



  • Log in om te kunnen reageren

#1

valentijn-12

    valentijn-12


  • 0 - 25 berichten
  • 19 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 16 juni 2014 - 20:22

Hallo allemaal,

 

Tijdens het practicum voor mijn studie scheikunde hebben wij een mutatie van gfp en het wildtype met elkaar vergeleken door een uv-vis absorptie spectrum en twee fluorescentie spectra (480 en 280 nm). Het idee is dat wij hieruit de mutatie kunnen halen.

We hebben een aantal mogelijke mutaties gekregen. Ik heb op deze mutaties al flink gegoogled, maar desalniettemin kom ik er niet uit.

 

Tyr66 wordt His

Emissie naar lagere golflengte (blauw)--> niet waarschijnlijk

 

Ser202 wordt Phe en tegelijk ook Thr203 wordt Ile

Geeft minder excitatie bij 475 nm terwijl 395nm gelijk blijft (helaas niet gemeten bij excitatie met 395nm)

 

Ala206 wordt Lys

voorkomt dimerisatie, is dit bij gebruikte concentraties (rond ordegrootte 10^-6 M) eigenlijk wel mogelijk?

 

Ile167 wordt Thr

Ratio van excitatie gevoeligheid voor 395 en 475 draait om

Emmissie naar hogere golflengte (roder) -->niet waarschijnlijk

Relatieve fluorescentie tov wildtype bij 475 excitatie 188%

 

Op het oog leek het eluaat minder groen dan van het wildetype (iets geler misschien, maar vooral minder fel)
Ik heb het uv-vis en fluorescentie bij 480 nm spectrum bijgevoegd.

 

Ik vermoed dat de dubbele mutatie het meest waarschijnlijk is. De enige vraag hierbij is dan of als de gevoeligheid voor een bepaalde excitatie golflengte afneemt, de intensiteit van de fluorescentie dit ook doet.

 

uv-vis.png

excitatie 480.png

 

Alvast heel erg bedankt!

Veranderd door valentijn-12, 16 juni 2014 - 20:24


Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Jan van de Velde

    Jan van de Velde


  • >5k berichten
  • 44881 berichten
  • Moderator

Geplaatst op 18 juni 2014 - 08:34

Opmerking moderator :

Iemand die hier een handje kan toesteken?

ALS WIJ JE GEHOLPEN HEBBEN....
help ons dan eiwitten vouwen, en help mee ziekten als kanker en zo te bestrijden in de vrije tijd van je chip...
http://www.wetenscha...showtopic=59270

#3

Kravitz

    Kravitz


  • >1k berichten
  • 4042 berichten
  • Moderator

Geplaatst op 18 juni 2014 - 09:36

Ala206 wordt Lys
voorkomt dimerisatie, is dit bij gebruikte concentraties (rond ordegrootte 10^-6 M) eigenlijk wel mogelijk?

Op Wikipedia las ik dat het WT gaat dimeriseren bij 5 mg/ml. Wetende dat GFP een moleculair gewicht heeft van 26,9kDa wil dat zeggen dat je dimerisatie krijgt rond de 186µM.
 

Ik vermoed dat de dubbele mutatie het meest waarschijnlijk is.

Die S202F en T203I lijkt inderdaad het meest waarschijnlijk.
 

De enige vraag hierbij is dan of als de gevoeligheid voor een bepaalde excitatie golflengte afneemt, de intensiteit van de fluorescentie dit ook doet.

Ik zou zeggen van ja. Minder excitatie betekent minder elektronen die naar een hoger energieniveau worden gebracht en bijgevolg ook minder elektronen die kunnen terugvallen en aanleiding geven tot fluorescentie.

"Success is the ability to go from one failure to another with no loss of enthusiasm" - Winston Churchill






Also tagged with one or more of these keywords: scheikunde

0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures