groeimedium voor E.coli (JM109)

tomazzz

hallo,

ik ben op zoek naar het optimale groeimedium voor de productie van GFP (green fluorescent proteïn) door de genetisch gemodificeerde E.coli-stom JM109.

wie kan me helpen?????

groetjes tom

Lala

Bloedplaat? Daar wil dat toch eigenlijk altijd wel op? TY-medium anders? Daar hebben wij E.coli JM 83 op laten groeien, wou best.

Anonymous

of een lb amp plaat kan ook

Anonymous

Met LB-Amp zal het niet lukken, omdat GFP-vectoren een kanamycine resistentiegen bevatten. Dus eerst je bacterien uitplaten op een LB-Kan plaat, vervolgens een kolonie aanenten in een grotere hoeveelheid LB medium (ook hier kanamycine toevoegen).

Vraag me trouwens wat je met het GFP wil.

*gast_André_*

Anonymous schreef:Met LB-Amp zal het niet lukken, omdat GFP-vectoren een kanamycine resistentiegen bevatten. Dus eerst je bacterien uitplaten op een LB-Kan plaat, vervolgens een kolonie aanenten in een grotere hoeveelheid LB medium (ook hier kanamycine toevoegen).

Vraag me trouwens wat je met het GFP wil.

we moeten de optimale inductie tijd bepalen, onze docent heeft al JM 109, met GFP gen in gebracht.

kunnen we dan het beste uitplaten of in een erlenmeyer laten induceren?

Wouter_Masselink

geen erlenmeyer gebruiken, babybillenkolf lijkt me beter geschikt.

Lala

Dat is toch een soort erlenmeyer met instulpingen in de bodem? Ik noem dat ook gewoon een erlenmeyer, eigenlijk:p

Wouter_Masselink

inderdaad 'een soort van'. Echter wanneer je een erlenmeyer in een schudkamer zet zal je medium gaan ronddraaien. In een babybillenkolf zal er veel meer lucht in het medium komen.

Natuurlijk zou het nog leuker zijn om een startcultuurtje te maken en dit over te gooien in een bioreactor. Dan kan je echt flink gaan opschalen.

*gast_André_*

Wouter_Masselink schreef:inderdaad 'een soort van'. Echter wanneer je een erlenmeyer in een schudkamer zet zal je medium gaan ronddraaien. In een babybillenkolf zal er veel meer lucht in het medium komen.

Natuurlijk zou het nog leuker zijn om een startcultuurtje te maken en dit over te gooien in een bioreactor. Dan kan je echt flink gaan opschalen.

we gaan het wel in een erlenmeyer doen, bij ons gaat het erom, dat we de optimale inductie tijd bepalen

ee erlenmeyer met cultuur er in, via een tijd reeks pak je 1,5 ml, en daar doe je dan een eiwit extractie mee.

en dan SDS PAGE, en dan kijken wat de totale gen expressie was van GFP

Wouter_Masselink

De optimale inductie tijd zal waarschijnlijk rond de 3 uur zitten (kwestie van een bekend experiment).

Moet je perse SDS page gebruiken voor je genexpressie bepaling? Dit is tijdrovend en is op een aantal manier vele male eenvoudiger te doen. Denk hierbij aan een real time PCR, of je zou zelfs de lichtintensiteit van je pellet kunnen gaan meten onder invloed van UV. Dit is een kwestie van een foto-opstelling maken, foto's maken en via de bekende beeld verwerkings software de intensiteit bepalen. genexpressie niveau's bepalen op eiwit niveau is mogelijk, maar over het algemeen niet gebruikelijk, tenzij enzymatische activiteit gemeten moet worden. Nog een heel andere mogelijkheid zou zijn om radio-actief gelabelde aminozuren in je kweekmedium te brengen en via deze route een inductie optimum te bepalen.

Denk er in alle gevallen wel aan dat je moet compenseren voor je verschil in O.D. De optimale inductie tijd is beter in een bioreactor te meten aangezien je hier zonder het millieu voor de bacterie aan te passen, medium af kan tappen.

Wetenschapsforum

Laatste berichten

Nieuwsberichten

groeimedium voor E.coli (JM109)

groeimedium voor E.coli (JM109)

Re: groeimedium voor E.coli (JM109)

Re: groeimedium voor E.coli (JM109)

Re: groeimedium voor E.coli (JM109)

Re: groeimedium voor E.coli (JM109)

Re: groeimedium voor E.coli (JM109)

Re: groeimedium voor E.coli (JM109)

Re: groeimedium voor E.coli (JM109)

Re: groeimedium voor E.coli (JM109)

Re: groeimedium voor E.coli (JM109)