Bandjes blijven hangen na gel-electroforese
Moderator: ArcherBarry
- Berichten: 1
Bandjes blijven hangen na gel-electroforese
Hallo,
Ik moest voor mijn studie onderzoek doen naar het TAS2R38 gen. Ik heb DNA geisoleerd uit wangslijm en een nanodrop gedaan voordat ik de electroforese inzette om er zeker van te zijn dat ik uberhaupt DNA had.
Na het bekijken van de gel (een 2% agarosegel) is te zien dat de marker gewoon gerund heeft maar bij de slotjes waar het DNA van de proefpersonen in zit zijn de bandjes blijven steken.
In elk slotje zat een mix van:
1 µl HaeIII
2 µl NEB 10x buffer
10 µl DNA
7 µl miliQ
4 µl (6x) loadingdye
Waarom zijn de bandjes blijven steken?
Ik moest voor mijn studie onderzoek doen naar het TAS2R38 gen. Ik heb DNA geisoleerd uit wangslijm en een nanodrop gedaan voordat ik de electroforese inzette om er zeker van te zijn dat ik uberhaupt DNA had.
Na het bekijken van de gel (een 2% agarosegel) is te zien dat de marker gewoon gerund heeft maar bij de slotjes waar het DNA van de proefpersonen in zit zijn de bandjes blijven steken.
In elk slotje zat een mix van:
1 µl HaeIII
2 µl NEB 10x buffer
10 µl DNA
7 µl miliQ
4 µl (6x) loadingdye
Waarom zijn de bandjes blijven steken?
- Berichten: 3.963
Re: Bandjes blijven hangen na gel-electroforese
2% agarose is wel redelijk veel. Bijgevolg worden de poriën in de gel redelijk klein waardoor enkel kleine stukjes goed scheiden. Ik zou eens proberen met 0,8% of 1% agarosegel.
Het is wel ietwat vreemd dat je DNA in het slotje blijft hangen. Zelfs bij een hoog percent agarose gel zou je toch een kleine migratie moeten zien. Mogelijks zit je ergens met een artefact of zit er en luchtbel onder sample.
Gebruik je een speciaal extractieprotocol?
Het is wel ietwat vreemd dat je DNA in het slotje blijft hangen. Zelfs bij een hoog percent agarose gel zou je toch een kleine migratie moeten zien. Mogelijks zit je ergens met een artefact of zit er en luchtbel onder sample.
Gebruik je een speciaal extractieprotocol?
Opmerking moderator
Aangezien die niet een alledaags huiswerkje is verplaatst deze even naar het vakforum voor moleculaire biologie.
"Success is the ability to go from one failure to another with no loss of enthusiasm" - Winston Churchill