Springen naar inhoud

Genotoxische potentie (Ames)



  • Log in om te kunnen reageren

#1

JelmerMVL

    JelmerMVL


  • >250 berichten
  • 468 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 22 november 2014 - 09:36

De methode van Ames begon volgens mij als volgt: salmonellabacteriën werden zo gemuteerd dat ze het aminozuur histidine niet meer konden maken. Hierdoor zou je verwachten dat de bacteriën niet meer groeien, want ze worden gekweekt in een agar waar geen histidine in zit. Aan deze agar werd  ook een mutagene stof toegevoegd. Het is mogelijk dat door deze mutaties veroorzaakt door de mutagene stof, de mutatie van Ames 'ongedaan' wordt gemaakt. Die kans is klein, maar bij enkele bacteriën treedt er reversie op en die kunnen gaan groeien. Deze kans wordt groter naarmate de concentratie van mutagene stoffen hoger is.

 

Om de vertaalslag naar mensen te maken (en daar komt ook mijn vraag over) wordt rattenleverhomogenaat toegevoegd aan de agar. Vervolgens is het dan kennelijk mogelijk om aan de hand van het wel (+S9) of niet (-S9) bevatten van rattenleverhomogenaat te zeggen of er sprake is van directe of indirecte mutagene stof. Kan iemand dat toelichten? (Of anders gezegd: hoe ik weet waar 'yes' en 'no' in de tabel moet komen).

 

Ames.PNG


Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Kravitz

    Kravitz


  • >1k berichten
  • 4042 berichten
  • Moderator

Geplaatst op 22 november 2014 - 11:29

Veel nieuwe compounds zijn niet direct schadelijk voor het menselijk lichaam, maar wanneer ze in onze lever verwerkt worden ontstaan vaak toxische derivaten.

 

Omdat salmonella bacteriën geen lever hebben kan je het indirecte toxische effect van een nieuwe compound niet testen. Gelukkig is daar een oplossing voor gevonden door een leverextract (S9) van ratten toe te voegen. In feite moet dat extract het menselijk metabolisme in de lever nabootsen.

 

Indirect mutagenic wil dus zeggen dat een compound na metabolisme in de lever mutageen wordt.

 

in de figuur kan je beide kolommen invullen door naar het aantal revertanten in de kolom -S9 en +S9 te kijken. Waarschijnlijk moet het aantal revertanten een bepaalde treshold overschrijden of significant verschillend zijn van de controle (blank).

"Success is the ability to go from one failure to another with no loss of enthusiasm" - Winston Churchill

#3

JelmerMVL

    JelmerMVL


  • >250 berichten
  • 468 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 22 november 2014 - 11:40

Bedankt voor de uitleg!

 

Als voorbeeld neem ik even rij B. Er zijn kennelijk zonder S9 450 kolonies en door toevoeging van S9 daalt het aantal kolonies naar 18. Hoe kan ik met die informatie dan zeggen of de toegediende mutagene stof indirect dan wel direct is geweest? Ik heb namelijk niet meer informatie dan in deze tabel te vinden is.

Veranderd door JelmerMVL, 22 november 2014 - 11:40


#4

Kravitz

    Kravitz


  • >1k berichten
  • 4042 berichten
  • Moderator

Geplaatst op 22 november 2014 - 12:28

For the record: -S9 en +S9 zijn twee afzonderlijke petri dishes waar een compound wordt aan toegevoegd.

 

Zonder S9 (= zonder lever metabolisme) zijn 450 kolonies in staat om te groeien, dat wil zeggen dat er in 450 kolonies een mutatie is opgetreden waardoor ze in de afwezigheid van histidine kunnen groeien. Bijgevolg zijn ze direct mutageen.

 

In de opstelling met S9 (= met lever metabolisme) wordt, zo blijkt, de compound afgebroken of omgezet in een andere molecule. In de tabel zien we nu dat er maar in 18 kolonies een mutatie is opgetreden die de groei op een medium zonder histidine mogelijk maakt. In 18 kolonies is er dus een indirect mutageen effect (het is immers na metabolisme in de lever).

Afhankelijk van het aantal herhalingen van zo'n experiment zullen 18 reverterende kolonies al dan niet significant verschillend zijn van 10 in de controle groep. Blijkbaar is 18 niet significant verschillend van 10 dus staat er "no" bij indirect mutageen.

 

Als je kijkt naar compound D dan zie je dat zonder S9 er mutaties optreden in 450 kolonies --> dus 450 keer een direct mutageen effect t.o.v. 10 in de controle groep. Belangrijk is ook om hier op te merken dat door toevoegen van S9 het aantal mutaties nog stijgt! Blijkbaar kan compound D omgezet worden in de lever tot een molecule die nog sterker mutageen is dan de originele  :shock:

 

Compound C toont het belang van deze studie aan. Stel dat compound C een nieuw geneesmiddel is dat enkel in een celcultuur getest werd. Wat blijkt, na toevoegen van compound C treden er nauwelijks meer mutaties op dan in de controle groep (12 i.p.v. 10) waaruit we kunnen besluiten dat compound C een veilig geneesmiddel is. 

Als je die molecule echter in de mens zou injecteren blijkt dat het in de lever wordt omgezet tot een sterk mutagene stof. En dat wil je liever niet als medicijn ;).

"Success is the ability to go from one failure to another with no loss of enthusiasm" - Winston Churchill

#5

JelmerMVL

    JelmerMVL


  • >250 berichten
  • 468 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 22 november 2014 - 14:24

Nu begrijp ik hoe het in elkaar steekt. Heel erg bedankt!  :D


#6

Kravitz

    Kravitz


  • >1k berichten
  • 4042 berichten
  • Moderator

Geplaatst op 22 november 2014 - 17:41

Graag gedaan!

"Success is the ability to go from one failure to another with no loss of enthusiasm" - Winston Churchill






Also tagged with one or more of these keywords: biologie

0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures