Waarom PCR product sequencen?

Moderator: ArcherBarry

Reageer
Gebruikersavatar
Berichten: 252

Waarom PCR product sequencen?

Hallo,
 
Waarom zou je een PCR product sequencen? Als je ervan uit gaat dat je je primers goed hebt ontworpen, en je na gel elektroforese een band ziet in de verwachte grootte, hoeft dit toch niet? Of is sequencen puur om zeker te zijn van je resultaat?
 
Alvast bedankt

Gebruikersavatar
Berichten: 3.963

Re: Waarom PCR product sequencen?

Als je dat PCR product in een vector wil kloneren om daarna een eiwit tot expressie te brengen is het extreem belangrijk zeker te zijn van je PCR product. Ieder polymerase maakt fouten, zeker Taq polymerase, dus je kan er niet zomaar van uitgaan dat je PCR product ook effectief voor je eiwit codeert. Stel je voor dat er door een foutje van het polymerase na 20 bp een stopcodon ontstaat...
"Success is the ability to go from one failure to another with no loss of enthusiasm" - Winston Churchill

Berichten: 83

Re: Waarom PCR product sequencen?

Daarnaast kan je ook met behulp van een PCR een punt mutatie inbrengen.. als je dat wilt, is het wel leuk om te weten/bewijzen dat het gelukt is.. dus sequencen maar!

Reageer