genenkanon

Moderator: ArcherBarry

Forumregels
(Middelbare) school-achtige vragen naar het forum "Huiswerk en Practica" a.u.b.
Zie eerst de Huiswerkbijsluiter
Reageer
Berichten: 16

genenkanon

Hallo,
 
 
Ik begrijp niet goed hoe dit in z'n werk gaat. Hoe komt dat gen dan juist op de gewenste plaats of is die plaats niet noodzakelijk? Gebruikt men de restrictie enzymen van het gewenste gen om dat stuk er te kunnen in laten passen? Hoe weet men of het gen wel het juiste is want zoiets is heel erg klein?
 
 
Alvast bedankt,

Gebruikersavatar
Berichten: 8.557

Re: genenkanon

Een gene gun schiet het DNA een cel in. Afhankelijk van wat je de cel in schiet kan dit extra-chromosomaal zijn (dus als plasmide blijven bestaan), een willekeurige plek in het chromosomaal DNA innemen (SceI, Toll2 integratie) of op een specifieke plek van het chromosoom integreren (CRISPR/Cas9).
 
Het gen wat wordt ingebracht is veelal in een plasmide gekloond. De juistheid van het plasmide kan door middel van RFLP en sequencing bepaald worden.
"Meep meep meep." Beaker

Berichten: 16

Re: genenkanon

dankuwel voor uw antwoord. lukt het ook vermeerderd worden met PCR of is dat alleen voor volledige dna strengen?
 
Dus men brengt volledige plasmides binnen met daarin de gekloonde genen of zijn de plasmides zelf gekloond?
 
 
danku

Gebruikersavatar
Berichten: 8.557

Re: genenkanon

Een plasmide is niet meer dan een circelvormig DNA. Gekloond is niet een term die nuttig is in deze context. Met PCR kan je ook je gen van interesse amplificeren. Dit kan je vervolgens met CRISPR/cas9 ook in het genoom integreren. De stabiliteit van dit lineaire DNA zal aanzienlijk minder zijn. Veelal gebruikt men daarom een plasmide.
 
Het lijkt dat je problemen hebt met de fundamentele theorie en nomenclatuur. Als ik een vreemd gen in wil brengen dan zou ik het gen via PCR amplificeren. Tegelijkertijd hier homologe uiteinden aan zetten, en vervolgens dmv homologe recombinatie in een plasmide naar keuze inbrengen. Dit plasmide vervolgens in bacterien vermenigvuldigen en isoleren en opzuiveren (maxi-prep). Afhankelijk van het organisme kan je dit via een gene gun, injectie, electroporatie of transfectie in brengen.
 
In het geval van vissen, salamanders etc. injecteren ik het plasmide samen met toll2 RNA of meganuclease eiwit in de bevruchte eicel om genoom integratie te bewerkstelligen.
"Meep meep meep." Beaker

Berichten: 16

Re: genenkanon

hartelijk bedankt.

Reageer