Springen naar inhoud

microscoop slide fixeren met behoud van RNA en GFP


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Willard

    Willard


  • >25 berichten
  • 64 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 10 februari 2006 - 12:54

Hallo, ik heb een probleem. Ik wil RNA extraheren uit cellen die GFP expresseren. Als ik de samples niet fixeer, verlies ik het GFP eiwit, omdat ik de slides moet dehydrateren in ethanol en xyleen. Daarom fixeer ik de slides in 4% paraformaldehyde, zodat het GFP eiwit gecross-linked wordt met de cel-matrix. Echter, het RNA kan ik er niet meer uithalen, omdat dat ook gecrosslinked is. Heeft iemand een suggestie wat ik kan proberen? Het ligt echt aan de paraformaldehyde, want ik heb al met gekweekte celletjes geprobeerd wat het verschil is als je ze fixeert. Ik kan wel RNA uit ongefixeerde cellen halen, maar niet uit paraformaldehyde-gefixeerde slides.

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

tobo

    tobo


  • >100 berichten
  • 150 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 10 februari 2006 - 14:08

Formaldehyde of paraformaldehyde lukt inderdaad niet. Er is een methode met EDTA, die staat beschreven in Mol.Mar.Biol. & Biotechn. 7 (2): 145-152 [1998] en/of Biochemical Genetics 40 (1/2): 53-62 [2002].

#3

Willard

    Willard


  • >25 berichten
  • 64 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 10 februari 2006 - 16:24

Formaldehyde of paraformaldehyde lukt inderdaad niet. Er is een methode met EDTA, die staat beschreven in Mol.Mar.Biol. & Biotechn. 7 (2): 145-152 [1998] en/of Biochemical Genetics 40 (1/2): 53-62 [2002].


Hoi Tobo, bedankt voor je suggestie. Ik heb die artikelen opgezocht. Het gaat niet over EDTA, maar over DMSO. Misschien is DMSO inderdaad het proberen waard, want in Cytometry, Volume 29, Issue 4 (p 340-350) lees ik dat fluorescentie behouden blijft met DMSO.
Ik ga het overleggen met m'n begeleider. In elk geval bedankt en... Wageningen Rulez :-)

#4

tobo

    tobo


  • >100 berichten
  • 150 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 11 februari 2006 - 12:10

Klopt, in het voorschrift dat "wij" gebruiken zie ik de afkortingen EDTA en DMSO. Als je wilt geef ik je het e-mail adres van een collega die daar meer verstand van heeft, via een PB-tje.
Yep...rulez....





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures