Laatste berichten
-
22:54
Herleiden afmetingen vanaf een foto 12
-
18:53
Ik wil studeren via afstandsonderwijs, kennen jullie Tech?
-
18:09
Rotatie van het heelal 32
-
17:19
Ervaringen met "herontdekkingen" 12
-
18 apr
hall effect in vloeistof gebruiken als stromingssensor 6
-
18 apr
Gezocht: de/een naam voor een getallenrij met een cauchyrij als partieelsommenrij
-
18 apr
Casus uit de praktijk: positief test THC 18
-
17 apr
speciale rel. theorie 4
-
17 apr
Vreemde stank in huis 11
-
17 apr
3 vragen over mijn rooskleurige r.berekening H2netGekoppeldeHBrflowbatterij.
-
17 apr
Interpretatie reactie-energie 3
-
17 apr
Logistic equation (Pierre Verhulst,Belgian Mathematician) 5
-
16 apr
vB 9
-
15 apr
Kunnen quantum Zonnecellen 190% quantum efficiënt zijn 1
-
15 apr
Python: sockets sluiten 4
-
14 apr
Een eenvoudige logische redenering waarom tijd niet kan bestaan 'daarbuiten' 6
-
14 apr
Hoe kun je op quantumwijze getallen vinden in een rij die kleiner zijn dan getal k 3
-
13 apr
Documentenverdwijnen uit onedrive 1
-
12 apr
Behoud van impulsmoment en energie 5
-
12 apr
INLOG STORING / TIPS 4
Nieuwsberichten
-
04 mar
Een nieuw soort magnetisme: altermagnetisme
-
31 okt
AI kan via stem diabetes vaststellen 11
-
21 okt
Einstein krijgt wéér gelijk 45
-
07 feb
witter dan wit 20
-
19 jun
irrigatie en de aardas
microscoop slide fixeren met behoud van RNA en GFP
Moderator: ArcherBarry
Forumregels
(Middelbare) school-achtige vragen naar het forum "Huiswerk en Practica" a.u.b.
Zie eerst de Huiswerkbijsluiter
(Middelbare) school-achtige vragen naar het forum "Huiswerk en Practica" a.u.b.
Zie eerst de Huiswerkbijsluiter
-
- Berichten: 64
microscoop slide fixeren met behoud van RNA en GFP
Hallo, ik heb een probleem. Ik wil RNA extraheren uit cellen die GFP expresseren. Als ik de samples niet fixeer, verlies ik het GFP eiwit, omdat ik de slides moet dehydrateren in ethanol en xyleen. Daarom fixeer ik de slides in 4% paraformaldehyde, zodat het GFP eiwit gecross-linked wordt met de cel-matrix. Echter, het RNA kan ik er niet meer uithalen, omdat dat ook gecrosslinked is. Heeft iemand een suggestie wat ik kan proberen? Het ligt echt aan de paraformaldehyde, want ik heb al met gekweekte celletjes geprobeerd wat het verschil is als je ze fixeert. Ik kan wel RNA uit ongefixeerde cellen halen, maar niet uit paraformaldehyde-gefixeerde slides.
-
- Berichten: 150
Re: microscoop slide fixeren met behoud van RNA en GFP
Formaldehyde of paraformaldehyde lukt inderdaad niet. Er is een methode met EDTA, die staat beschreven in Mol.Mar.Biol. & Biotechn. 7 (2): 145-152 [1998] en/of Biochemical Genetics 40 (1/2): 53-62 [2002].
-
- Berichten: 64
Re: microscoop slide fixeren met behoud van RNA en GFP
Formaldehyde of paraformaldehyde lukt inderdaad niet. Er is een methode met EDTA, die staat beschreven in Mol.Mar.Biol. & Biotechn. 7 (2): 145-152 [1998] en/of Biochemical Genetics 40 (1/2): 53-62 [2002].
Hoi Tobo, bedankt voor je suggestie. Ik heb die artikelen opgezocht. Het gaat niet over EDTA, maar over DMSO. Misschien is DMSO inderdaad het proberen waard, want in Cytometry, Volume 29, Issue 4 (p 340-350) lees ik dat fluorescentie behouden blijft met DMSO.
Ik ga het overleggen met m'n begeleider. In elk geval bedankt en... Wageningen Rulez
-
- Berichten: 150
Re: microscoop slide fixeren met behoud van RNA en GFP
Klopt, in het voorschrift dat "wij" gebruiken zie ik de afkortingen EDTA en DMSO. Als je wilt geef ik je het e-mail adres van een collega die daar meer verstand van heeft, via een PB-tje.
Yep...rulez....
Yep...rulez....
