Springen naar inhoud

zout precipitaie van verschillende collagenen


  • Log in om te kunnen reageren

#1

aspergillie

    aspergillie


  • >25 berichten
  • 28 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 23 februari 2006 - 22:14

Ik wil verschillende types collageen isoleren uit weefsels. Ik heb de weefsels gemaald en laten incuberen met guanidine-hcl om de proteoglycanen kwijt te raken. Daarna heb ik het geknipt met pepsine.
Maar nu?
Ik heb een oud protocol waarmee type II, IX en XI neergeslagen kunnen worden met dialyse. Maar ik wil ook andere types. Ik heb rondgezocht en kwam iets tegen over NaCl precipitatie, nl:
2.5 M voor type I
0.9 M type II
1.8 M type III
1.8 M type IX
1.2 M alfa 1, 2 en 3 van type IX.

Krijg ik nou dus bij 1.8 M zowel type III als IX?
En ik wil ook graag zowiezo type VI en XI, weten jullie daar iets voor? Het mag ook een totaal ander protocol zijn, maar graag wel met dialyse of zout-precipitatie.

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Wouter_Masselink

    Wouter_Masselink


  • >5k berichten
  • 8252 berichten
  • VIP

Geplaatst op 23 februari 2006 - 23:09

Bij 1,8 M (ammoniumfosfaat) krijg je inderdaad zowel type III als type IX.

Het doel van dialyse is niet om eiwitten neer te slaan. Je verlaagd hierbij de zoutconcentratie

Als je eiwitten moet scheiden die heel veel op elkaar lijken dan zal dit lang niet altijd goed lukken met uitzouting. Je zou een FPLC als mogelijkheid kunnen bekijken. Het hangt natuurlijk af van de zuiverheid die je wilt verkrijgen. Een zo hoog mogelijke zuiverheid wordt verkregen door een ELISA uit te voeren.
"Meep meep meep." Beaker

#3

aspergillie

    aspergillie


  • >25 berichten
  • 28 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 24 februari 2006 - 12:40

Klopt, met dialyse krijg je de juiste zoutconcentratie terwijl je wat andere moleculen uit je oplossing haalt.
Maar NaCl werkt toch ook net als ammoniumfosfaat?
En ik gebruik nu deze methode omdat deze heel goedkoop is itt andere methoden.
FRET: de beste uitvinding sinds het gesneden brood.

#4

Wouter_Masselink

    Wouter_Masselink


  • >5k berichten
  • 8252 berichten
  • VIP

Geplaatst op 25 februari 2006 - 13:37

Ammonium fosfaat wordt van oudsher gebruikt. Ik zie geen principiŽle nadelen aan NaCl, echter als er altijd ammonium fosfaat wordt gebruikt, wie ben ik dan om daar van af te wijken.
"Meep meep meep." Beaker





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures