Springen naar inhoud

[Scheikunde/hematologie] Fotometrische bepaling hemoglobine


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Suusje

    Suusje


  • 0 - 25 berichten
  • 3 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 10 oktober 2006 - 13:35

Hoi allemaal,

Ik heb een vraag over iets wat eigenlijk heel simpel hoort te zijn, maar wat op een (voor mij) vreemde manier wordt gevraagd waardoor ik het niet meer snap.
Het gaat over de fotometrische bepaling van hemoglobinegehalte in bloed. Ik zal een groot deel van de tekst geven, anders is het denk ik niet duidelijk.

De bepaling van de Hb concentratie voeren we uit volgens de HiCN methode; hierbij wordt het instabiele Hb omgezet in stabiele hemiglobinecyanide. Dit gebeurt met het reagens van Van Kampen en Zijlstra (Hb reagens). Bloed wordt gemengd met het reagens, de ery's lyseren en het vrijgekomen hemoglobine wordt omgezet in hemiglobinecyanide. De Hb concentratie wordt berekend met behulp van een HiCN standaard waarvan de concentratie bekend is.

HB reagens: 200 mg LaTeX LaTeX , 50 mg KCN, 140 mg LaTeX LaTeX en 1 ml detergens opgelost in water en aangevuld tot 1 liter. De extinctie van het reagens moet ten opzichte van water 0 zijn.

Hemiglobinecyanide standaardoplossing (RIVM of hierop gecontroleerd)

Het volgende in duplo:
2,0 ml standaardoplossing + 3,0 ml Hb reagens
3,0 ml standaardoplossing + 2,0 ml Hb reagens
ongeveer 5 ml standaardoplossing

Uitvoering van de bepaling:
5,0 ml Hb reagens
0,02 ml bloed

Meet van de standaardoplossingen en de bepalingen de extinctie bij 540 nm tegen water als blanco.

Berekening en nu komt het..:)
De Hb standaard is tot stand gekomen door bloed te mensen met Hb reagens in dezelfde verhouding als de bepaling (0,02:5,0) dus een verdunning van 251x. Voor het berekenen van de Hb concentratie van de standaard moeten we de HiCN concentratie van de standaardoplossing (37,90 mmol/L) omrekenen naar mmol Hb/L. De concentraties van de standaardverdunningen kunnen we dan berekenen.

Deze concentraties worden in een grafiek uitgezet tegen de gemeten extincties. In deze grafiek kunnen de concentraties van de monsters worden afgelezen.


Het kan aan mij liggen, maar ik vind het onduidelijk. Ze gebruiken Hb standaard, Hb reagens en standaardoplossing naar mijn idee door elkaar qua namen. Weet iemand wat ik dus nu moet doen?

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Wouter_Masselink

    Wouter_Masselink


  • >5k berichten
  • 8258 berichten
  • VIP

Geplaatst op 10 oktober 2006 - 14:39

Je maakt een callibratiecurve van je verdunningsreeks. Vervolgens meet je hiervan de extincties en zet je deze uit in een grafiek. Nu bepaal je de extinctie van je monster. Deze moet binnen je callibratiecurve liggen, extrapoleren is nogal gevaarlijk bij spectrometrie. Hieruit kan je de concentratie van je monster afleiden.
"Meep meep meep." Beaker

#3

Suusje

    Suusje


  • 0 - 25 berichten
  • 3 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 10 oktober 2006 - 18:02

Volgens mij is het de bedoeling dat je eerst de concentraties berekend, dan een grafiek maakt en dan wat dingen afleest. Bedoel je dat ook? Ik heb namelijk ook geen idee hoe je hier de concentratie moet berekenen. Ik heb het al op school aan iemand gevraagd en die gaf mij haar resultaten als voorbeeld, maar ze gaf niet duidelijk aan wat ze nou precies deed in die berekening.

Dit:

Standaard oplossing: 43,99 Ķmol/l.

Tabel 1: resultaten
concentratie in mmol/l Extinctie
reagens - 0,0 - 0,001
Verdunning2,5 - 4,42 - 0,232
Verdunning1,6,7 - 6,61 -0,342
Standaard - 11,04 - 0,576
monster 1 - 3,35 - 0,241
monster 2 - 3,44 - 0,248

Voorbeeld berekening monster:
Iris: aantal mmol/l = (0,052*extinctie+0,0008)*251
= (0,052*0,241+0,0008)*251
= 3,35 mmol/l

Ik weet waar die 251 op slaat, dat is de verdunning die je maakt. Maar waar ze die 0,052 en 0,0008 vandaan haalt?

#4

Mrtn

    Mrtn


  • >1k berichten
  • 4220 berichten
  • VIP

Geplaatst op 10 oktober 2006 - 18:21

Je maakt een grafiek van bekende concentraties. Dat is je ijklijn: in excel meestal grafiektype 'spreiding' met een lineaire trendlijn). Nu bestaat er een lineair verband tussen de extinctie en concentratie, dus kan je met de vergelijking van de trendlijn je onbekede berekenen. Dus van een extinctie, de concentratie van je onbekende monsters berekenen.
De 0,052 en 0,0008 zullen asafsnede en RC van de ijklijn zijn.
Of course, the theory of relativity only works if you're going west.
-Calvin-

#5

Suusje

    Suusje


  • 0 - 25 berichten
  • 3 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 10 oktober 2006 - 19:07

Oke, maar de enige concentraties die ik heb zijn toch van de blanco en van de HiCN standaard? Als dat klopt ga ik het even proberen. Bedankt in ieder geval!





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures