Springen naar inhoud

[Biochemie] Colorimetrische dosering + hydrolyse saccharose


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Cerise

    Cerise


  • >25 berichten
  • 41 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 07 november 2006 - 20:36

Mijn vragen gaan deze keer over een practicum biochemie, onderverdeeld in twee delen. Hier alvast mijn vragen over deel I:


1) Colorimetrische dosering van creatine en creatinine in urine

uitvoering:
- neem een urinestaaltje en verdun het 100 maal
(m.a.w. 1 ml urine + 99 ml water)
- pipetteer in de genummerde proefbuisjes:
I: 0 ml CT-oplossing + 4 ml water
II: 0,25 ml CT-oplossing + 3,75 ml water
III: 0,5 ml CT-oplossing + 3,5 ml water
IV: 1 ml CT-oplossing + 3 ml water
V: 2 ml CT-oplossing + 2 ml water
VI: 3 ml CT-oplossing + 1 ml water
VII: 4 ml CT-oplossing + 0 ml water
VIII: 2 ml verdunde urine + 2 ml water
IX: 2 ml verdunde urine + 2 ml water
Opm.: CT-oplossing = standaard creatinine-oplossing met een concentratie van 2,00 . 10-2 g/L.
- Voeg hierna 1 ml NaOH-oplossing (0,75 M) en 1 ml pikrinezuur (PZ) toe.
Opmerking: creatininie op zich is niet absorberend, daarom laat men het eerst reageren met pikrinezuur om een rood creatinine-pikraat te vormen. De absorptie van dit creatinine-pikraat is dan een maat voor de concentratie van het creatinine.
- De buisjes goed homogeniseren en 15 min. laten rusten.
- Met behulp van een cuvette en een colorimeter meet je de absorptie bij 500 nm.
De waarden die we hierbij bekwamen waren:
I: 0,035
II: 0,050
III: 0,060
IV: 0,070
V: 0,130
VI: 0,170
VII: 0,215
VIII: 0,170
IX: 0,175
(Excuseer mij, inderdaad geen gebruik van eenheden, maar de eenheid van absorptie ontsnapt me ook even. Is dit dezelfde als bij de concentratie?)

Er wordt gevraagd een ijkcurve op te stellen (van I tot VII) - absorptie versus concentratie standaard-oplossing - en vervolgens de concentratie aan creatinine in het urinestaaltje (VIII en IX) te bepalen, rekening houdend met de verdunningsfactor.

De meeste andere groepjes namen bij de ijkcurve gewoon de absorptie versus het volume concentratie aan creatinine. (Ze meenden dat er weer en fout in de opgave stond en omdat volgens hen de concentratie steeds gelijk blijft aan 2,00 . 10-2 g/L.
Dit lijkt ons echter onjuist, aangezien er ook water wordt toegevoegd en deze oplossing uiteindelijk toch verdund wordt.
Is dit correct op te lossen met volgende formule:
Cs/Cv = Vv/Vs
waarbij:
Cs = concentratie van de stockoplossing, hier dus 2,00 . 10-2 g/L.
Cv = concentratie van de verdunde oplossing (de onbekende die we moeten zoeken om in de grafiek te zetten)
Vs = volume dat men van de stockoplossing heeft afgemeten (zie "pipeteer in de genummerde proefbuizen .... ml CT-oplossing)
Vv = volume van de verdunde oplossing (aantal ml water + aantal ml CT-oplossing ???)
Hierbij is echter geen rekening gehouden met de 1 ml NaOH-oplossing (0,75 M) en de 1 ml pikrinezuur. Hebben deze ook een invloed op de concentratie ???

Voor het bepalen van de concentratie creatinine in het urinestaaltje, dienen we deze waarde uit de grafiek te halen en vervolgens om te rekenen rekening houdend met de verdunningsfactor? Of gebruiken we hierbij de formule van Lambert-Beer? : Cx . A = C . Ax
waarin: Cx = onbekende concentratie (hier de concentratie creatinine in het urinestaaltje)
C = bekende concentratie (berekend voor de CT-oplossing en in de ijkcurve terug te vinden)
Ax = bekende absorptie van de onbekende concentratie
A = bekende absorptie van de bekende concentratie


Hopend op een verhelderende respons,
Cerise.

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Dalton

    Dalton


  • >250 berichten
  • 808 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 07 november 2006 - 22:47

- Met behulp van een cuvette en een colorimeter meet je de absorptie bij 500 nm.
  De waarden die we hierbij bekwamen waren:
  I: 0,035
  II: 0,050
  III: 0,060
  IV: 0,070
  V: 0,130
  VI: 0,170
  VII: 0,215
  VIII: 0,170
  IX: 0,175
(Excuseer mij, inderdaad geen gebruik van eenheden, maar de eenheid van absorptie ontsnapt me ook even. Is dit dezelfde als bij de concentratie?)

De absorptie is dimensieloos, het is gewoon een getal dus dit klopt.

De meeste andere groepjes namen  bij de ijkcurve gewoon de absorptie versus het volume concentratie aan creatinine. (Ze meenden dat er weer en fout in de opgave stond en omdat volgens hen de concentratie steeds gelijk blijft aan 2,00 . 10-2 g/L.  
Dit lijkt ons echter onjuist, aangezien er ook water wordt toegevoegd en deze oplossing uiteindelijk toch verdund wordt.  

Het hele idee van een ijklijn is dat je verschillende concentraties gebruikt.
I: 0 ml CT-oplossing + 4 ml water = 0 mg/ml
II: 0,25 ml CT-oplossing + 3,75 ml water = 1,25mg/ml
III: 0,5 ml CT-oplossing + 3,5 ml water = 2,5mg/L
IV: 1 ml CT-oplossing + 3 ml water = 5 mg/L
V: 2 ml CT-oplossing + 2 ml water = 10mg/L
VI: 3 ml CT-oplossing + 1 ml water = 15mg/L
VII: 4 ml CT-oplossing + 0 ml water = 20mg/L

 
Hierbij is echter geen rekening gehouden met de 1 ml NaOH-oplossing (0,75 M) en de 1 ml pikrinezuur. Hebben deze ook een invloed op de concentratie ???

Nee, de NaOH en pikrine is in alle oplossingen precies hetzelfde dus kun je dit op elkaar wegstrepen.

Je urine heb je trouwens 200x verdund.
Eerst 1ml+99ml (=100x)
Daarna nog 2x (2ml+2ml)


Hoe je uiteindelijk de berekening moet maken durf ik niet te zeggen, dat kan op verschillende manieren, het kan heel simpel in excell, maar waarschijnlijk wil je leraar zien dat je een grafiek gebruikt.





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures