Springen naar inhoud

Genetica: hoe gen in vector brengen?


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Buck

    Buck


  • 0 - 25 berichten
  • 5 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 25 maart 2007 - 10:28

Er wordt voortduren gesproken over gentherapie e.d. , maar nergens wordt er deftig uitgelegd hoe ze het gen nu precies in een virus/andere vector brengen...


Wordt er gebruik gemaakt van promoters ofzo?

Graag wat correcte uitleg.

Bedankt

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

jefcox

    jefcox


  • 0 - 25 berichten
  • 19 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 25 maart 2007 - 19:25

inderdaad

En hoe vervoert en levert de vecter het gen af?

jef
and when I see you, I really see you upside down ...

godvolkoffie. --> jef

#3

Wouter_Masselink

    Wouter_Masselink


  • >5k berichten
  • 8252 berichten
  • VIP

Geplaatst op 25 maart 2007 - 22:05

inderdaad

En hoe vervoert en levert de vecter het gen af?

jef


De vector levert het gen af op verschillende manieren. Vaak kunnen plasmiden via electroporatie of een andere techniek worden ingebracht. Wanneer een virus vector wordt gebruikt dan zal dit virus zich net zoals in de natuur de gastheer cel infecteren. Wanneer je te maken het met een retro-virus (zoals gebruikelijk bij gen-therapie) dan zal deze vector zich in het chromosomaal DNA van de gastheercel plaatsen.

Een promotor zal altijd worden gebruikt. Anders zal je insert niet worden afgelezen. Ik vindt je vraag verder vrij onduidelijk. Kan je een iets gerichtere vraag stellen?
"Meep meep meep." Beaker

#4

Buck

    Buck


  • 0 - 25 berichten
  • 5 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 26 maart 2007 - 07:59

OK dus je hebt een schaaltje met virussen, adenovirussen bijvb. en je hebt een gen dat je hebt kunnen afzonderen. Dan meng je gewoon beiden met een promoter bijvb. deze van Herpes Simplex en het is gebeurt? Het gen gaan zich dan automatisch in het genoom van het virus aansluiten?

#5

Wouter_Masselink

    Wouter_Masselink


  • >5k berichten
  • 8252 berichten
  • VIP

Geplaatst op 26 maart 2007 - 10:00

OK dus je hebt een schaaltje met virussen, adenovirussen bijvb. en je hebt een gen dat je hebt kunnen afzonderen. Dan meng je gewoon beiden met een promoter bijvb. deze van Herpes Simplex en het is gebeurt? Het gen gaan zich dan automatisch in het genoom van het virus aansluiten?


Nee, zo makkelijk is het niet. Uitgaande van een plasmide (idee is hetzelfde als een virus, alleen zonder eiwit envelop), dan bevat deze al een promotor. Er is dus een startsite (atc) bekend. Deze kan worden gedigesteerd met bijvoorbeeld NcoI. Hierna moet nog een andere digestie worden uitgevoerd van de plasmide. Let er hierbij op dat je een restrictie enzym kiest welke in dezelfde buffer werkt als je eerste restrictie enzym (NcoI), maar 1 keer in je plasmide knipt en het liefst stiky-ended.

Vervolgens voer je een PCR uit van je targetgen. Dit doe je met primers die je zo hebt ontworpen dat je restrictiesites toevoegd aan je plasmide welke overeenkomen met de restrictiesites welke al in je plasmide zijn gedigesteerd. Deze digesteer je ook.

Nadat alles is gezuiverd dan kan je het target gen en je plasmide bij elkaar brengen en aan elkaar ligeren met behulp van ligase.

Het is niet verstandig om een aparte promotor aan je plasmide toe te voegen. Dit maakt het allemaal veel gecompliceerder.
"Meep meep meep." Beaker





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures