Springen naar inhoud

Methyleen blauw


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Let-it B

    Let-it B


  • 0 - 25 berichten
  • 4 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 16 mei 2008 - 10:53

Hallo allen,

Graag wil aantonen of er zich in een bak met water levende of dode bacterien bevinden. Hiervoor wil ik gebruik maken van methyleen blauw. Na lang zoeken weet ik nu hoe de oplossing voor methyleen blauw moet worden samengesteld, namelijk:

voor dood weefsel en kernkleuring:
0,3 g methyleenblauw, 30 ml alcohol (95%), 100 ml water mengen.

En nu heb ik dus een oplossing van methyleen blauw, maar hoe moet ik het gebruiken?

- Moet ik uit het bak met water een hoeveelheid water (sample) nemen en die vervolgens vermengel met de oplossing methyleen blauw. En wat zijn dan de hoeveelheden die ik met elkaar moet mengen??
- Moet ik dat onder de microscoop bekijken of veranderd de gehele oplossing van kleur?
- Is het zo dat hoe meer dode weefsel zich in de oplossing bevindt des te blauwer de oplossing kleurt?

wat is de juiste werkwijze?

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

WendyTje

    WendyTje


  • >250 berichten
  • 773 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 16 mei 2008 - 11:48

Ik heb het niet met bacterien gebruikt maar met cellen, maar het zal wel vergelijkbaar zijn.

Je maakt een oplossing van de methyleenblauw in PBS, uit het potje is te geconcentreerd, dan zal ook je hele achtergrond donkerblauw zijn en dan zie je bijna niks meer, de exacte verdunning valt wel te googelen. Dat voeg je aan wat cellen toe, die je onder een microscoop moet bekijken. De dode cellen (of, dus bacterien) kleuren blauw en de levende niet. Aan de oplossing zelf zul je dus niets zien dat moet echt onder de microscoop. Ik heb toen gewoon een protocolletje van internet geplukt, er staan er zat, zeker als je in het engels zoekt, en dat werkte prima.
To boldly go where I`ve never been before

Be nice to nerds, chances are you`ll end up working for one

#3

Let-it B

    Let-it B


  • 0 - 25 berichten
  • 4 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 20 mei 2008 - 14:27

Hey Wendytje,

Bedankt voor je reactie, maar ik kom er niet helemaal uit. Zelf ben ik een natuurkundige dus weet niet zoveel van bacterien af. Jij hebt het over PBS, wat houdt dit precies in?
Vervolgens zeg je: "Dat voeg je aan wat cellen toe, die je onder een microscoop moet bekijken."
Met "dat" bedoel je waarschijnlijk de oplossing methyleenblauw. Nou is me oplossing 130ml. Hoeveel ml moet ik toevoegen en aan hoeveel cellen moet ik dit toevoegen.

Mijn situatie is als volgt:
Ik heb een aquarium staan. In mijn aquarium heb ik water vol met bacterien. Nu wil ik met methyleen blauw aantonen hoeveel bacterien erin zitten (monster). Vervolgens doe ik er een bepaald hoeveelheid chemicalen bij waardoor een aantal bacterien doodgaan. Vervolgens wil ik nogmaals de hoeveelheid bacterien aantonen m.b.v. methyleenblauw. Hoe zou jij dit aanpakken?

Op het internet heb ik niet kunnen vinden wat ik zoek. Heb je misschien een aantal (engelse)steekwoorden voor me?

#4

Drs.P

    Drs.P


  • >100 berichten
  • 163 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 20 mei 2008 - 19:06

Hoi Let-it B,

PBS is Phosphate Buffered Saline, een gebufferde oplossing waarin je eukaryotische cellen in leven kan houden. (juist pH osmolariteit etc). Meer hierover vind je op wikipedia : PBS.

Aangezien je bacteriŽn wilt onderzoeken (die in water leven) heb je geen PBS nodig, kun je gewoon vanaf water werken.

Een mooie uitleg over baterie staining vind je hier: Microscopie pagina over bacteriŽn. Alleen dan ben je er nog niet. Je wilt namelijk hoeveelheden bepalen, voor eukaryotische cellen doe je dat in een telkamer (counting chamber, bv bŁrker). Hierin tel je de cellen op 1 mm2, dit vermenigvuldig je met 10 000 (10-4) en eventueel de verdunningsfactor (meestal 2, 1 op 1 met staining solution). Dan heb je het aantal cellen per ml.

De kleurstof voor zoogdiercellen is meestal trypan blue 0,4%. Zoektermen die je kunt gebruiken "viable stain(ing)".

Voor bacteriŽn is het heel moeilijk om met de microscoop een oplossing te kwantificeren, daarom zou ik eerder gebruik maken van het opkweken op een agarplaat en koloniŽn tellen. Dit laatste zou je eigenlijk onder VMT omstandigheden moeten doen, om te voorkomen dat je bacteriŽn oppikt die niet uit het water komen. Dat is natuurlijk moeilijk om thuis te doen.

Hoop dat je hier wat aan hebt.

#5

WendyTje

    WendyTje


  • >250 berichten
  • 773 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 20 mei 2008 - 19:13

Ah Drs P. was me net voor!

Tja erg veel meer heb ik er ook niet aan toe te voegen, ik dacht dat het ging om een bacteriekweek in het lab. Ik heb werkelijk geen idee hoeveel bacterien er (per milliliter water) in een aquarium zitten, dus ik weet niet precies hoe je dit het beste kan aanpakken, behalve met idd een telkamer en eventueel wat andere kleuringen (gram?) dan alleen methyleen blauw.

PBS is idd phosphate bufferd saline, een zoutoplossing dus, maar voor bacterien kun je gewoon (eventueel liefst) gedestilleerd water gebruiken.

Wat zoekopdrachten in google? Nouja igg altijd in het engels, dus dat worden combi`s met:
methlyene blue/ trypan blue, (bacteria, protocol)
bacteria, (detection)
bacteria staining
bacteria content aquaria
en uiteraard al wat drs P. zei.
? ik heb hier niet op gezocht, maar dit is wat ik zou proberen.

veel succes!

Veranderd door WendyTje, 20 mei 2008 - 19:15

To boldly go where I`ve never been before

Be nice to nerds, chances are you`ll end up working for one

#6

Let-it B

    Let-it B


  • 0 - 25 berichten
  • 4 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 04 juni 2008 - 16:00

hallo,

Ik wou jullie (WendyTje en Drs.P) bij deze nog bedanken voor jullie uitleg. Het heeft me in de juiste richting gebracht.
Bedankt voor de uitleg.





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures