Springen naar inhoud

Competitie analyse met emsa


  • Log in om te kunnen reageren

#1

zwitterion

    zwitterion


  • >100 berichten
  • 108 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 24 mei 2008 - 12:14

Hoi,

Ik heb een probleem met EMSA of gelbandvertraging, meer specifiek met een variant erop, namelijk de competitie analyse.
Ik zal de techniek even schetsen:
Men test of een bepaalde transcriptiefactor (TF) wel degelijk op een bepaalde DNA sequentie bindt. Daarvoor gebruikt men gemerkte (radioactief bv) oligonucleotiden die bestaan uit deze bindingssequentie. Men brengt deze oligo's samen met het celextract (dat de TF bevat) op gel. Als de TF op de oligo's bindt, zien we een vertraging van de gelband. De TF bindt op de oligo's, dus de oligo's worden meer sterisch gehinderd dan niet-gebonden oligo's.

Een variant op EMSA is competitie analyse, waarmee je de bindingsspecificiteit van de TF kunt nagaan. Daarbij worden koude of niet-gemerkte oligo's gebruikt. Er is competitie ts gemerkt en nt-gemerkt. En als je steeds meer niet-gemerkt toevoegt, zal er 'n groter aandeel TF binden aan niet-gemerkt dan aan gemerkt. En bij stijgende concentratie nt-gemerkt, zal je de intensiteit van de bandjes (van gemerkt) zien afnemen.

Nu vroeg ik mij af wat je daar exact uit kan besluiten. Als je die intensiteit van de bandjes ziet afnemen, dan kun je dus besluiten dat de TF wel degelijk specifiek bindt? Is dat het?

Alvast bedankt,
Zwitterion
Everything is chemistry.

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.




0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures