Springen naar inhoud

Klonen in plasmide


  • Log in om te kunnen reageren

#1

DanielleQ

    DanielleQ


  • >25 berichten
  • 62 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 08 oktober 2008 - 13:29

Hallo,
Ik heb een opdracht bij genetica welke over klonen van een plasmide gaat:

Een plasmide wordt geknipt met HindIII alvorens te electroforeren. Je hebt de beschikking over:
• HindIII, 100 U/ ml;
• Water (MilliQ);
• Plasmide: 1 g/25 l
• Buffer B, 10x.

Dan is de vraag:
Waarom voeg je het enzym HindIII als laatste toe?

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

WendyTje

    WendyTje


  • >250 berichten
  • 773 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 08 oktober 2008 - 15:35

Wat denk je zelf?
wat denk je dat er gebeurd als je een gevoelig enzym in zeer kleine hoeveelheid in een leeg epje pipetteerd?
wat denk je dat er gebeurd als je een gevoelig enzym in een 10 te geconcentreerde zoutbuffer pipetteerd?
wat denk je dat er gebeurd als je een gevoelig enzym alleen water pipetteerd?
Wat is er handiger aan als je het als laatste zou doen?

t is meerendeel een kwestie van even logisch nadenken.
To boldly go where I`ve never been before

Be nice to nerds, chances are you`ll end up working for one

#3

DanielleQ

    DanielleQ


  • >25 berichten
  • 62 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 08 oktober 2008 - 17:35

In een leeg epje eerst het enzym en dan de rest: enzym gaat kapot?
In een 10x geconcentreerde buffer: enzym gaat kapot??
In water: ?

Water maakt de buffer minder geconcentreerd, dus blijft het enzym intact?

#4

Wouter_Masselink

    Wouter_Masselink


  • >5k berichten
  • 8252 berichten
  • VIP

Geplaatst op 09 oktober 2008 - 22:04

De reactie hierboven zijn helemaal juist. Echter dit is niet de enige reden, er zijn meerdere redenen te verzinnen. Je restrictie enzym als een na laatste toevoegen kan ook. Als je eerst water en buffer toevoegt, kan je in principe je restrictie enzym toevoegen en als laatste je plasmide. Je enzym werkt dan nog steeds. Echter elke stap is een mogelijke fout die je kan maken. Daarom is het verstandig om het duurste onderdeel, als laatste toe te voegen.
"Meep meep meep." Beaker





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures