Klonen in plasmide

DanielleQ

Hallo,

Ik heb een opdracht bij genetica welke over klonen van een plasmide gaat:

Een plasmide wordt geknipt met HindIII alvorens te electroforeren. Je hebt de beschikking over:

HindIII, 100 U/ ml;

Water (MilliQ);

Plasmide: 1 g/25 l

Buffer B, 10x.

Dan is de vraag:

Waarom voeg je het enzym HindIII als laatste toe?

WendyTje

Wat denk je zelf?

wat denk je dat er gebeurd als je een gevoelig enzym in zeer kleine hoeveelheid in een leeg epje pipetteerd?

wat denk je dat er gebeurd als je een gevoelig enzym in een 10 te geconcentreerde zoutbuffer pipetteerd?

wat denk je dat er gebeurd als je een gevoelig enzym alleen water pipetteerd?

Wat is er handiger aan als je het als laatste zou doen?

t is meerendeel een kwestie van even logisch nadenken.

DanielleQ

In een leeg epje eerst het enzym en dan de rest: enzym gaat kapot?

In een 10x geconcentreerde buffer: enzym gaat kapot??

In water: ?

Water maakt de buffer minder geconcentreerd, dus blijft het enzym intact?

Wouter_Masselink

De reactie hierboven zijn helemaal juist. Echter dit is niet de enige reden, er zijn meerdere redenen te verzinnen. Je restrictie enzym als een na laatste toevoegen kan ook. Als je eerst water en buffer toevoegt, kan je in principe je restrictie enzym toevoegen en als laatste je plasmide. Je enzym werkt dan nog steeds. Echter elke stap is een mogelijke fout die je kan maken. Daarom is het verstandig om het duurste onderdeel, als laatste toe te voegen.

Wetenschapsforum

Laatste berichten

Nieuwsberichten

Klonen in plasmide

Klonen in plasmide

Re: Klonen in plasmide

Re: Klonen in plasmide

Re: Klonen in plasmide