Is er iemand van jullie die iets kent van cDNA-synthese?
Daarbij gebruik je een mastermix en daaraan wordt DTT of dithiotriëtol toegevoegd. Dat is een reducerend agens, het breekt dus zwavelbruggen.
Nu vroeg ik mij af wrm dat wordt toegevoegd aan die mastermix? Om tertiaire van het mRNA te verbreken msh? Hoewel, vormt mRNA S-bruggen dan?
Ik hoop dat iemand mij kan helpen.
Zwitterion
Laatste berichten
-
18:53
Ik wil studeren via afstandsonderwijs, kennen jullie Tech?
-
18:51
Herleiden afmetingen vanaf een foto 5
-
18:09
Rotatie van het heelal 32
-
17:19
Ervaringen met "herontdekkingen" 12
-
21:28
hall effect in vloeistof gebruiken als stromingssensor 6
-
18 apr
Gezocht: de/een naam voor een getallenrij met een cauchyrij als partieelsommenrij
-
18 apr
Casus uit de praktijk: positief test THC 18
-
17 apr
speciale rel. theorie 4
-
17 apr
Vreemde stank in huis 11
-
17 apr
3 vragen over mijn rooskleurige r.berekening H2netGekoppeldeHBrflowbatterij.
-
17 apr
Interpretatie reactie-energie 3
-
17 apr
Logistic equation (Pierre Verhulst,Belgian Mathematician) 5
-
16 apr
vB 9
-
15 apr
Kunnen quantum Zonnecellen 190% quantum efficiënt zijn 1
-
15 apr
Python: sockets sluiten 4
-
14 apr
Een eenvoudige logische redenering waarom tijd niet kan bestaan 'daarbuiten' 6
-
14 apr
Hoe kun je op quantumwijze getallen vinden in een rij die kleiner zijn dan getal k 3
-
13 apr
Documentenverdwijnen uit onedrive 1
-
12 apr
Behoud van impulsmoment en energie 5
-
12 apr
INLOG STORING / TIPS 4
Nieuwsberichten
-
04 mar
Een nieuw soort magnetisme: altermagnetisme
-
31 okt
AI kan via stem diabetes vaststellen 11
-
21 okt
Einstein krijgt wéér gelijk 45
-
07 feb
witter dan wit 20
-
19 jun
irrigatie en de aardas
Mastermix cdna-synthese
Moderator: ArcherBarry
-
- Berichten: 824
Re: Mastermix cdna-synthese
Ik heb even wat gezocht en mijn eigen vermoeden werd deels bevestigd: waarschijnlijk dient het (mede) om de RNAses, die eigenlijk altijd wel aanwezig zijn, te inactiveren. Maar je kunt de discussie hierover hier even nalezen.
Ik wou dat ik een elektron was, dan kon ik altijd paren
-
- Berichten: 4.220
Re: Mastermix cdna-synthese
Voor zover mij bekend wordt het daar inderdaad voor gebruikt. Ook bijvoorbeeld cRNA probes voor ISH worden vaak 'beschermd' met DTT, waar na synthese van de probe geen enzymen meer voor nodig zijn. Uit mijn hoofd doe ik het zelf met een paar ul 2,5 M: een flinke dosis.
Zoals wordt opgemerkt in de discussie waar Bas naar verwijst zou mercaptoethanol dezelfde functie hebben, hoewel dat een stuk giftiger is dan DTT (en een veel sterkere geur heeft, waar ik zelf echt een hekel aan heb).
Omdat er in principe geen zwavel voorkomt in RNA zou ik er niet van uit gaan dat mRNA een structuur vormt met S-bruggen.
Zoals wordt opgemerkt in de discussie waar Bas naar verwijst zou mercaptoethanol dezelfde functie hebben, hoewel dat een stuk giftiger is dan DTT (en een veel sterkere geur heeft, waar ik zelf echt een hekel aan heb).
Omdat er in principe geen zwavel voorkomt in RNA zou ik er niet van uit gaan dat mRNA een structuur vormt met S-bruggen.
Of course, the theory of relativity only works if you're going west.
-Calvin-
-Calvin-
-
- Berichten: 108
Re: Mastermix cdna-synthese
Dus eigenlijk heeft DTT 2 belangrijke functies: destabiliseren van Rnasen en stabilisatie van het reverse transcriptase.
Ik heb ook al hier en daar gelezen dat het secundaire mRNA-structuren zou verwijderen. Maar inderdaad, waar komt die zwavel dan vandaan...
Ik heb ook al hier en daar gelezen dat het secundaire mRNA-structuren zou verwijderen. Maar inderdaad, waar komt die zwavel dan vandaan...
Everything is chemistry.
-
- Berichten: 4.220
Re: Mastermix cdna-synthese
Een reverse transcriptase (RT) is ook een enzym en dus zou ik verwachten dat het net zo als een RNase gedenatureerd wordt DTT.Dus eigenlijk heeft DTT 2 belangrijke functies: destabiliseren van Rnasen en stabilisatie van het reverse transcriptase.
Dit is echt zo'n voorbeeld waar heel veel mensen heel veel verschillende dingen over zeggen. En niemand lijkt te weten wat nou waar is.. ook dat kan soms bij wetenschap horen.
Of course, the theory of relativity only works if you're going west.
-Calvin-
-Calvin-
-
- Berichten: 108
Re: Mastermix cdna-synthese
Het punt is dat ik dat moet weten voor de verdediging van mijn project, als ze mij die vraag stellen. Altijd vervelend als er geen sluitende antwoorden zijn, maar ik kan natuurlijk altijd zeggen dat er discussie over is 
Everything is chemistry.
