Wetenschapsforum

Hoi,

Voor een project probeer ik een exon uit het mRNA te splicen. Er is voor o.a. de ziekte van duchenne muscular dystrophy (DMD) al beschreven dat met een antisense-oligonucleotide (AON) een splice site van het exon geblokkeerd kan worden op het mRNA, waardoor dit exon samen met de intronen uit het mRNA gespliced wordt.

Dat is dus simpel gezegd het principe.

Mijn kennis over splicing gaat niet veel verder dan dat er splice sites zijn die geknipt worden en dat er dan op 'miraculeuze wijze' de exonen aan elkaar verbonden worden.

Even snel googlen wijst er al op uit, dat het spliceosoom rond de splicesites, op specifieke punten aan het mRNA bindt, waardoor het intron mRNA in een soort lus komt te zitten, en tenslotte het spliceosoom aan de andere splice site bindt en de de 'lus' intron-mRNA eruit gespliced wordt.

Mijn vraag is hoe dit dan zit als er met een AON geblokkeerd wordt?

Voorbeeld: je wilt exon 3 eruit splicen, en dat om exon 3, het intron 2 en 3 liggen

Je maskeert alleen de 3' splice site van intron 2 (dus 3' splicesite van exon 3, omdat de 3'/5' splice sites altijd van intron perspectief bekeken worden)

Wat ik heb begrepen ) als je exon 3 eruit willen splicen, dat het spliceosoom dan begint bij de 5' splicesite van intron2 en dan eindigt bij de 3' splice site van intron 3.

Maar hier zit dan toch nog een splice site tussen die hij overslaat? Namelijk de 5' splice site van intron 3.

Waarom slaat hij dan die splice site over?

En wat als je niet de 3' splice site van exon 3 blokkeert, maar de 5' splice site exon 3, hoe zit het dan met de splicing?

Ik hoop dat ik het een beetje duidelijk uitgelegd hebt, en dat mijn vraag correct gesteld is.

Alvast bedankt,