HPLC

Moderator: ArcherBarry

Berichten: 15

HPLC

Hoi :oops: ,

Ik weet wel dat er reeds vragen gesteld zijn over HPLC, en heb er al wat bij zitten zoeken hoor, maar ik weet niet of er daarbij antwoorden op deze vragen te vinden zijn:

Wat is de invloed (invloed op de retentietijd, piekhoogte, piekvorm, kwaliteit van de scheiding,... ) van het geïnjecteerde volume, wat is de invloed van het pompdebiet en tenslotte wat is de invloed van de golflengte-instelling?

Als iemand mij hierbij wat kan helpen

Alvast merci!

Berichten: 2.399

Re: HPLC

Ok here we go:

geïnjecteerde volume: Dit heeft geen invloed op de retentietijd, kun je bedenken waarom? De piekhoogte uiteraard wel, want de piekoppervlakte is evenredig met de concentratie. Ja en invloed op de scheiding.......... Wanneer de kolom wordt overladen, dan uiteraard wel. Als je naar de formule voor resolutie kijkt (t2-t1)/(0,5 Wb1 +0,5 Wb2)

dan veranderd je W, dus wordt je resolutie negatief beinvloed, maarja dit is meer theoretisch denk ik :oops:

Pompdebiet: Zeker van invloed op de retentietijd, dit kan je ook zelf beargumenteren neem ik aan? Piekvorm zal scherper worden, want je analiet komt eerder de kolom uit, dus minder tijd voor piekverbreding door diffusie. Je resolutie zal afnemen (dit is wat kort door de bocht bekijk eens de van Deemter vergelijking ook te vinden op het forum).

Golflengte: Je praat hier over een UV detector neem ik aan. Wat denk je zelf wat er gebeurd als je een andere golflengte gaat nemen? Neem een spectrum op van je analiet als je het niet weet, de invloed op de piekhoogte kun je dan zelf wel beoordelen. Aangezien een detector niets aan je systeem veranderd, zal je retentietijd en scheiding niet veranderen.

Berichten: 1.122

Re: HPLC

Pompdebiet: Zeker van invloed op de retentietijd, dit kan je ook zelf beargumenteren neem ik aan? Piekvorm zal scherper worden, want je analiet komt eerder de kolom uit, dus minder tijd voor piekverbreding door diffusie. Je resolutie zal afnemen (dit is wat kort door de bocht bekijk eens de van Deemter vergelijking ook te vinden op het forum).
misschien een beetje mieren**kerig maar toch even voor de duidelijkheid voor Jason; Het klopt wat Napoleon beschrijft maar uiteraard alleen in het geval van een hoger pompdebiet! Een verlaging heeft natuurlijk een omgekeerd effect op retentietijd, piekvorm en resolutie. Afbeelding (voor het geval dat nog niet duidelijk was :oops: )

Grtz Bas

Berichten: 2.399

Re: HPLC

Hehehehe ja uiteraard, ik ben een beetje vaag geweest daar :oops:

Berichten: 15

Re: HPLC

:oops: Bedankt voor jullie reacties!!

Nu is 't toch al veel duidelijker voor mij...

Greetz Jason

Berichten: 15

Re: HPLC

De piekhoogte uiteraard wel, want de piekoppervlakte is evenredig met de concentratie


Mss een stomme opmerking maar... De concentratie verandert toch niet, enkel het geïnjecteerde volume verandert, is toch wel iets anders denk ik... of heb ik het mis? :oops:

Grtz Jason

Berichten: 1.122

Re: HPLC

idd. Het geïnjecteerde volume veranderd dus ook de hoeveelheid geïnjecteerde stof. En de piekoppervlakte is evenredig met de hoeveelheid stof!

Grtz Bas

Berichten: 266

Re: HPLC

idd. Het geïnjecteerde volume veranderd dus ook de hoeveelheid geïnjecteerde stof. En de piekoppervlakte is evenredig met de hoeveelheid stof!


Is dat niet afhankelijk van het type detector?

Je hebt concentratiegevoelige en massagevoelige detectors.

Berichten: 1.153

Re: HPLC

cheMister heeft gelijk: je hebt massa of concentratie gevoelige detectoren. Dus wat Bas zegt gaat niet helemaal op. Dit geldt alleen voor massa gevoelige detectoren.

({edit} typo)

Berichten: 62

Re: HPLC

Ehh, hoe werkt dat dan? Concentratie = massa (opgeloste stof) x volume, dus als het volume omlaag gaat, gaat de concetratie evenredig omlaag... toch?

Gebruikersavatar
Berichten: 6.314

Re: HPLC

Oh ja? Je hebt 100 mL van een 1M NaCl. Daar neem je 50 mL van. Is de concentratie in die 50 mL opeens 0.5M geworden?? :oops:
You can't possibly be a scientist if you mind people thinking that you're a fool. (Douglas Adams)

Gebruikersavatar
Berichten: 6.853

Re: HPLC

Concentratie = massa (opgeloste stof) x volume
:oops:

Concentratie is hoeveelheid gedeeld door volume. Afbeelding

Berichten: 62

Re: HPLC

Het was laat mensen... TN snapt hem nu...

Berichten: 1.122

Re: HPLC

kan iemand dan een voorbeeld noemen van een concentratiegevoelige detector in GC? De detectoren die ik ken die bij GC gebruikt worden zijn volgens mij namelijk allemaal massagevoelig. Of is NMR misschien concentratiegevoelig?

grtz Bas

Gebruikersavatar
Berichten: 6.314

Re: HPLC

Wie heeft het over GC? We zitten in het LC-subforum :oops:

Bijv een UV-detector is concentratiegevoelig.
Of is NMR misschien concentratiegevoelig?
NMR wil je niet gebruiken als kwantitatieve detectiemethode, en al helemaaaaaaaal niet online (vraag maar aan Eva :oops: ).
You can't possibly be a scientist if you mind people thinking that you're a fool. (Douglas Adams)

Reageer