HPLC
Moderator: ArcherBarry
-
- Berichten: 15
HPLC
Hoi ,
Ik weet wel dat er reeds vragen gesteld zijn over HPLC, en heb er al wat bij zitten zoeken hoor, maar ik weet niet of er daarbij antwoorden op deze vragen te vinden zijn:
Wat is de invloed (invloed op de retentietijd, piekhoogte, piekvorm, kwaliteit van de scheiding,... ) van het geïnjecteerde volume, wat is de invloed van het pompdebiet en tenslotte wat is de invloed van de golflengte-instelling?
Als iemand mij hierbij wat kan helpen
Alvast merci!
Ik weet wel dat er reeds vragen gesteld zijn over HPLC, en heb er al wat bij zitten zoeken hoor, maar ik weet niet of er daarbij antwoorden op deze vragen te vinden zijn:
Wat is de invloed (invloed op de retentietijd, piekhoogte, piekvorm, kwaliteit van de scheiding,... ) van het geïnjecteerde volume, wat is de invloed van het pompdebiet en tenslotte wat is de invloed van de golflengte-instelling?
Als iemand mij hierbij wat kan helpen
Alvast merci!
-
- Berichten: 2.399
Re: HPLC
Ok here we go:
geïnjecteerde volume: Dit heeft geen invloed op de retentietijd, kun je bedenken waarom? De piekhoogte uiteraard wel, want de piekoppervlakte is evenredig met de concentratie. Ja en invloed op de scheiding.......... Wanneer de kolom wordt overladen, dan uiteraard wel. Als je naar de formule voor resolutie kijkt (t2-t1)/(0,5 Wb1 +0,5 Wb2)
dan veranderd je W, dus wordt je resolutie negatief beinvloed, maarja dit is meer theoretisch denk ik
Pompdebiet: Zeker van invloed op de retentietijd, dit kan je ook zelf beargumenteren neem ik aan? Piekvorm zal scherper worden, want je analiet komt eerder de kolom uit, dus minder tijd voor piekverbreding door diffusie. Je resolutie zal afnemen (dit is wat kort door de bocht bekijk eens de van Deemter vergelijking ook te vinden op het forum).
Golflengte: Je praat hier over een UV detector neem ik aan. Wat denk je zelf wat er gebeurd als je een andere golflengte gaat nemen? Neem een spectrum op van je analiet als je het niet weet, de invloed op de piekhoogte kun je dan zelf wel beoordelen. Aangezien een detector niets aan je systeem veranderd, zal je retentietijd en scheiding niet veranderen.
geïnjecteerde volume: Dit heeft geen invloed op de retentietijd, kun je bedenken waarom? De piekhoogte uiteraard wel, want de piekoppervlakte is evenredig met de concentratie. Ja en invloed op de scheiding.......... Wanneer de kolom wordt overladen, dan uiteraard wel. Als je naar de formule voor resolutie kijkt (t2-t1)/(0,5 Wb1 +0,5 Wb2)
dan veranderd je W, dus wordt je resolutie negatief beinvloed, maarja dit is meer theoretisch denk ik
Pompdebiet: Zeker van invloed op de retentietijd, dit kan je ook zelf beargumenteren neem ik aan? Piekvorm zal scherper worden, want je analiet komt eerder de kolom uit, dus minder tijd voor piekverbreding door diffusie. Je resolutie zal afnemen (dit is wat kort door de bocht bekijk eens de van Deemter vergelijking ook te vinden op het forum).
Golflengte: Je praat hier over een UV detector neem ik aan. Wat denk je zelf wat er gebeurd als je een andere golflengte gaat nemen? Neem een spectrum op van je analiet als je het niet weet, de invloed op de piekhoogte kun je dan zelf wel beoordelen. Aangezien een detector niets aan je systeem veranderd, zal je retentietijd en scheiding niet veranderen.
-
- Berichten: 1.122
Re: HPLC
misschien een beetje mieren**kerig maar toch even voor de duidelijkheid voor Jason; Het klopt wat Napoleon beschrijft maar uiteraard alleen in het geval van een hoger pompdebiet! Een verlaging heeft natuurlijk een omgekeerd effect op retentietijd, piekvorm en resolutie. (voor het geval dat nog niet duidelijk was )Pompdebiet: Zeker van invloed op de retentietijd, dit kan je ook zelf beargumenteren neem ik aan? Piekvorm zal scherper worden, want je analiet komt eerder de kolom uit, dus minder tijd voor piekverbreding door diffusie. Je resolutie zal afnemen (dit is wat kort door de bocht bekijk eens de van Deemter vergelijking ook te vinden op het forum).
Grtz Bas
- Berichten: 6.314
Re: HPLC
Wie heeft het over GC? We zitten in het LC-subforum
Bijv een UV-detector is concentratiegevoelig.
Bijv een UV-detector is concentratiegevoelig.
NMR wil je niet gebruiken als kwantitatieve detectiemethode, en al helemaaaaaaaal niet online (vraag maar aan Eva ).Of is NMR misschien concentratiegevoelig?
You can't possibly be a scientist if you mind people thinking that you're a fool. (Douglas Adams)