HiTrap 5 ml protein G kolom

biochemiefreak

Ik heb een HiTrap kolom droog laten lopen. Dat is natuurlijk oerdom

Maar ik moest nog wat bespreken en toen liep de kolom droog naar het spoelen met 20% ethanol (foutje bedankt). Normaal gesproken haal je het kolom materiaal er weer af en breng je het er weer op nieuw op. Maar het geval is het is zo'n kant en klaar kolom van hitrap. Ik dacht er aan om het materiaal nogmaals door de spoelen met 20% ethanol en dan ook nog weer terug halen om de luchtbellen er uit te halen bij een lage snelheid. Overnachten laten spoelen. Heeft iemand van jullie dit ook eens mee gemaakt. Ik hoop dat hij het nog doet want ze kosten 600 euro.

MvG Ron

Gideon

Zijn er geen calibratieprocedures voor je kolombedding? Je zou zo het materiaal zo weer moet kunnen regenereren met iets. Hoe dit precies gaat weet ik niet, misschien weet een van de analytici het wel, zijn ze toch nog ergens goed voor FLAME (in de biochemie

)

biochemiefreak

Ik heb hem de hele nacht door laten spoelen met 20% ethanol de kolom pakking ziet er nog wel redelijk uit geen lucht of droge stukken. Structuur lijkt compact. Ik heb hem nog doorgespoeld met loopbuffer pH 7.0 en elutie buffer 2.7 er is geen piek te vinden bij de buffers, dus er is geen pakking verloren gaan. Tenminste dat hoop ik

Ik ga vandaag sub van een hybridoma er overheen gooien en dan hoop ik dat het antilichaam er aan blijft hangen.

MvG Ron

biochemiefreak

De methode hier boven beschreven is dus ideaal voor het regeneren van dit type kolom.

Ik heb er zo'n 600 ml sub. Over heen laten lopen. Dit duurde ongeveer 5 uur

en daarna het IgG er af gehaald. En tot mijn genoegen was er een hoge opbrengst aan IgG en de kolom heeft het gehouden. Ik herhaal het experiment vandaag weer met 600 ml sub.

Dus tip: zelfs voorgepakte kolommen kun je regeneren al wil je fabrikant het natuurlijk niet hebben want hij wil zoveel mogelijk kolommen verkopen

MvG Ron

JeroenCV

Dus tip: zelfs voorgepakte kolommen kun je regeneren al wil je fabrikant het natuurlijk niet hebben want hij wil zoveel mogelijk kolommen verkopen

dat klopt. Zolang bij het droog lopen geen gaten in je pakking zijn gekomen, kan je een kolom regeneren.

Wetenschapsforum

Laatste berichten

Nieuwsberichten

HiTrap 5 ml protein G kolom

HiTrap 5 ml protein G kolom

Re: HiTrap 5 ml protein G kolom

Re: HiTrap 5 ml protein G kolom

Re: HiTrap 5 ml protein G kolom

Re: HiTrap 5 ml protein G kolom