Hallo,
ik heb twee vraagjes over IEC:
In onze cursus hebben we bij gaschromatografie gezien dat we soms moleculen moeten derivatiseren om de vluchtigheid te verhogen en om polaire functionele groepen af te schermen (om interactie met de actieve plaatsen van de stationaire fase tegen te gaan zodat je geen tailing hebt). Nu staat er bij vloeistofchromatografie dat polaire componenten niet gederivatiseerd moeten worden. Ik begrijp nu wel dat je bij vloeistofchromatografie niet moet derivatiseren om de vluchtigheid te verhogen, maar er kan toch nog altijd interactie gebeuren tussen die functionele groepen en de stationaire fase zodat tailing mogelijk blijft? Waarom moeten we hier dan niet derivatiseren?
Bij ionenuitwisselingschromatografie is de affiniteit voor de stationaire fase groter als het gesolvateerd volume kleiner is. Maar nu vraag ik me af of het gesolvateerd volume van een ion groter is bij een grotere afmeting van een ion of een kleinere afmeting van een ion want in onze cursus staat dat het gesolvateerd volume kleiner is bij Ba2+ dan bij Na+ , terwijl Na+ toch een kleiner ion is en je hierbij toch een kleiner gesolvateerd volume verwacht.
Kan iemand me helpen?
alvast bedankt!
Groetjes
Stef.
Laatste berichten
-
13:35
Vraag 2009 Juli Vraag 5 2
-
12:51
positie 2
-
10:44
Schroefdraad berekening 8
-
00:15
[scheikunde] Kan chloorgas de geleiding van elektriciteit belemmeren? 9
-
21:15
Weerfrustratie 9
-
18:08
geen minkowski-ruimte toch? Doe ik dit nou fout? 15
-
14:16
do-re-mi-fa-so vliegtuigen 7
-
14:16
Kunnen quantum Zonnecellen 190% quantum efficiënt zijn 3
-
13:57
De Euro Nederlandse 100 qubit computer komt eraan
-
23 apr
projectiel 8
-
23 apr
Verschil tussen deze 2 vragen 5
-
23 apr
[scheikunde] berekeningen labo vitamine c bepaling 1
-
22 apr
[wiskunde] rode en witte ballen verdelen 8
-
22 apr
Rotatie van het heelal 41
-
22 apr
Muntje opgooien 14
-
21 apr
Reactiviteit silyl enol ethers 1
-
21 apr
Criterium voor vochtretentie
-
21 apr
speciale rel. theorie 5
-
21 apr
Vogels in de stad zijn goede klussers
-
21 apr
Ervaringen met "herontdekkingen" 15
Nieuwsberichten
-
04 mar
Een nieuw soort magnetisme: altermagnetisme
-
31 okt
AI kan via stem diabetes vaststellen 11
-
21 okt
Einstein krijgt wéér gelijk 45
-
07 feb
witter dan wit 20
-
19 jun
irrigatie en de aardas
kolom-vloeistofchromatografie
Moderator: ArcherBarry
-
- Berichten: 2.399
Re: kolom-vloeistofchromatografie
Derivatiseren doen we in de eerste plaat liever niet natuurlijk (kost alleen maar tijd), alleen als het strikt noodzakelijk is. Wanneer je LC gaat doen, doe je dit vaak omdat de component te polair is om met de GC te scheiden. Derivatiseren gebeurd bij de LC wel, maar dan wordt er bijvoorbeeld een UV-label aan je analiet gehangen.
Tailing vraag,
Ik baseer mijn verhaal even op een C18 kolom! In een C18 kolom verwacht je geen polaire groepen (immer C18 is super apolair). Maar er zitten inderdaad polaire groepen in zo`n kolom die voor tailing kunnen zorgen. De oorzaak ligt bij het fabriceren van de kolom. Bij het aanbrengen van de C18 op het silica (uitgangsmateriaal), komt er maar op 20-40% (uit mijn hoofd) van de silanol sites een C18 keten. De rest zijn dus nog vrije silanol groepen. Wanneer er gedraaid wordt met wat hogere pH dan deprotoneren de silanol groepen (pKa 3,5)en worden dus negatief geladen. Op dat moment kunnen bijvoorbeeld basische stikstof atomen in je analiet voor GIGANTISCHE tailing zorgen.
Wat kun je tegen die tailing doen?
- endcappen
-Bij een hele lage pH werken (kleiner dan 3). Maarja nadeel is dan dat je de base protoneerd en deze een korte retentie krijgt (werkt dus bij de grote moleculen)
-De ionic strenght omhoog gooien (25mM to 50mM)
-Of een competatieve amine toevoegen zoals triethylamine, zodat deze je basische sites bezet houdt!
Bedoelde je dit?
Verder je IEC, lading speelt ook een rol!
Tailing vraag,
Ik baseer mijn verhaal even op een C18 kolom! In een C18 kolom verwacht je geen polaire groepen (immer C18 is super apolair). Maar er zitten inderdaad polaire groepen in zo`n kolom die voor tailing kunnen zorgen. De oorzaak ligt bij het fabriceren van de kolom. Bij het aanbrengen van de C18 op het silica (uitgangsmateriaal), komt er maar op 20-40% (uit mijn hoofd) van de silanol sites een C18 keten. De rest zijn dus nog vrije silanol groepen. Wanneer er gedraaid wordt met wat hogere pH dan deprotoneren de silanol groepen (pKa 3,5)en worden dus negatief geladen. Op dat moment kunnen bijvoorbeeld basische stikstof atomen in je analiet voor GIGANTISCHE tailing zorgen.
Wat kun je tegen die tailing doen?
- endcappen
-Bij een hele lage pH werken (kleiner dan 3). Maarja nadeel is dan dat je de base protoneerd en deze een korte retentie krijgt (werkt dus bij de grote moleculen)
-De ionic strenght omhoog gooien (25mM to 50mM)
-Of een competatieve amine toevoegen zoals triethylamine, zodat deze je basische sites bezet houdt!
Bedoelde je dit?
Verder je IEC, lading speelt ook een rol!
-
- Berichten: 152
Re: kolom-vloeistofchromatografie
Eerst voor die derivatisatie. U geeft een voorbeeld waarin je derivatisatie gebruikt bij vloeistofchromatografie( silica is toch een statioanaire fase die gebruikt wordt bij kolomvloeistofchr. hé!?), maar daar zit net het probleem een beetje bij mij. In onze cursus staat dat je derivatisatie wel gebruikt bij gasvloeistofchromatografie, maar niet bij kolomvloeistofchromatografie en ik begrijp net niet waarom je bij vloeistof chromatografie polaire groepen niet hoeft de derivatiseren.
Wat je van die lading zegt is inderdaad waar, maar toen heb ik gewoon een voorbeeld gezocht waar het verschil meer duidelijk was. Maar stel nu dat je Ba2+ en Ca2+ hebt. Normaal zou je verwachten dat Ba2+ een groter gesolvateerd ion is dan Ca2+ gewoon omdat het Ba2+ en grotere afmeting heeft. Maar toch blijkt dit niet zo te zijn (volgens mijn cursus ) en dat begrijp ik eigenlijk niet zo goed. Waarom is het volume van het gesolvateerd Ba2+ kleiner dan dat van Ca2+ terwijl het Ba2+ ion op zich een grotere afmeting heeft?
voila, dat was het dan!
groetjes
Wat je van die lading zegt is inderdaad waar, maar toen heb ik gewoon een voorbeeld gezocht waar het verschil meer duidelijk was. Maar stel nu dat je Ba2+ en Ca2+ hebt. Normaal zou je verwachten dat Ba2+ een groter gesolvateerd ion is dan Ca2+ gewoon omdat het Ba2+ en grotere afmeting heeft. Maar toch blijkt dit niet zo te zijn (volgens mijn cursus ) en dat begrijp ik eigenlijk niet zo goed. Waarom is het volume van het gesolvateerd Ba2+ kleiner dan dat van Ca2+ terwijl het Ba2+ ion op zich een grotere afmeting heeft?
voila, dat was het dan!
groetjes
-
- Berichten: 152
Re: kolom-vloeistofchromatografie
hihi, zo gek! ik heb net gezien dat je op dezelfde dag jarig bent als ik (alleen een paar jaartjes vroeger geboren) 
Jorim: Het spammen met onzinnige berichten, zoals alleen een link, smilie of reclame, is niet toegestaan. Plaats alleen opmerkingen als je echt iets toe te voegen hebt. Oftwel, houd het even ONtopic!
Jorim: Het spammen met onzinnige berichten, zoals alleen een link, smilie of reclame, is niet toegestaan. Plaats alleen opmerkingen als je echt iets toe te voegen hebt. Oftwel, houd het even ONtopic!
-
- Berichten: 2.399
Re: kolom-vloeistofchromatografie
Laat ik de vraag dan maar eens omdraaien: vertel mij maar waarom wel derivatiseren en waarom je tailing zou krijgen met een polaire component op een C18 kolom.
Dus waarom kan je bij een GC tailing krijgen (welk mechanisme speelt hierbij een rol), en projecteer dit eens op een HPLC.
Verder, vergeet die opmerking van het derivatiseren maar bij de HPLC van mij. Dat is nu niet relevant voor jou
Over de IEC, Het gaat om de hoeveelheid lading, en de grootte van je molecuul.
Dus waarom kan je bij een GC tailing krijgen (welk mechanisme speelt hierbij een rol), en projecteer dit eens op een HPLC.
Verder, vergeet die opmerking van het derivatiseren maar bij de HPLC van mij. Dat is nu niet relevant voor jou
Over de IEC, Het gaat om de hoeveelheid lading, en de grootte van je molecuul.
-
- Berichten: 152
Re: kolom-vloeistofchromatografie
de stationaire fase bij kolom-vloeistofchromatografie hoeft toch niet altijd een apolaire fase te zijn (zoals C18 bij jou), maar kan toch ook gewoon silica zijn. en bij silica heb je toch vrije silanolgroepen. Aangezien die polair zijn kunnen die toch interageren met polair functionele groepen en dan onstaat toch ook tailing (dacht ik toch )
)-
- Berichten: 2.399
Re: kolom-vloeistofchromatografie
Er zijn inderdaad silanol kolommen, maar dan praat je over normal phase chromatografie. Normal phase chromatografie wordt gebruikt voor apolaire stoffen als vetten. Bij normal phase gebruikt men dus een polaire kolom en een apolaire mobielefase.
De situatie die jij schetst komt dus niet voor!
Verder onstaat de piektailing bij RP-HPLC dus zoals ik eerder al had beschreven. Er zijn ook maar een beperkt aantal silanol groepen beschikbaar, dus als er analiet door je kolom loopt, binden bepaald deeltjes en de rest gaat door omdat simpel weg geen plaats beschiklbaar is. Hierdoor smeert je analiet dus uit en krijg je tailing.
Een normale polaire-apolaire interactie zorgt niet voor tailing. Een apolaire-polaire interactie zoals bij normal phase zorgt ook niet voor tailing, dit is juist het scheidings principe
De situatie die jij schetst komt dus niet voor!
Verder onstaat de piektailing bij RP-HPLC dus zoals ik eerder al had beschreven. Er zijn ook maar een beperkt aantal silanol groepen beschikbaar, dus als er analiet door je kolom loopt, binden bepaald deeltjes en de rest gaat door omdat simpel weg geen plaats beschiklbaar is. Hierdoor smeert je analiet dus uit en krijg je tailing.
Een normale polaire-apolaire interactie zorgt niet voor tailing. Een apolaire-polaire interactie zoals bij normal phase zorgt ook niet voor tailing, dit is juist het scheidings principe
-
- Berichten: 152
Re: kolom-vloeistofchromatografie
Wat je me vertelt begrijp ik wel. Ik bedoelde dat als je een polaire stationaire fase hebt en je substanties in het mengsel dat je wil scheiden hebben ook polaire groepen, dat er dan interactie ontstaat tussen deze twee (dat is de definitie van tailing die wij gezien bij GLC= interactie tussen de polaire functionele groepen van de substanties en de polaire (=actieve) plaatsen op de stationaire fase). Mijn redenering was dan dat je zowel bij GLC als kolomvloeistofchromatografie substanties kan hebben met polaire functionele groepen en polaire stationaire fasen. Ik begreep dus niet waarom je bij GLC een afscherming moet doen van de plaire functionele groepen en dit niet hoeft te doen bij kolomvloeistofchromatografie.
Alvast bedankt voor de hulp!
Stef.
Alvast bedankt voor de hulp!
Stef.
