Ik ben bezig nu met het maken van mijn afstudeer verslag.
Ik was bezig met materiaal en methode en ik ben bij de RNA isolatie blijven steken op een klein dingetje en ik kan het niet zo snel vinden.
Ik heb een gel-elektroforese gedaan met RNA monsters en loadingbuffer. Ik krijg als alles goed gaat twee bandjes. Deze twee bandjes zegt iets over de concentratie (vooruit bepaald met de nanodrop) en kwaliteit van je RNA monsters. Ik moest dit checken ivm de cDNA synthese.
Maar nu vraag ik mij af hoeveel Dalton zijn deze twee bandjes? Ik kan dit maar niet vinden. Misschien weet iemand van jullie het wel.
MvG Ron
Laatste berichten
-
15:28
Vraag 2009 Juli Vraag 5 5
-
12:51
positie 2
-
10:44
Schroefdraad berekening 8
-
00:15
[scheikunde] Kan chloorgas de geleiding van elektriciteit belemmeren? 9
-
21:15
Weerfrustratie 9
-
23 apr
geen minkowski-ruimte toch? Doe ik dit nou fout? 15
-
23 apr
do-re-mi-fa-so vliegtuigen 7
-
23 apr
Kunnen quantum Zonnecellen 190% quantum efficiënt zijn 3
-
23 apr
De Euro Nederlandse 100 qubit computer komt eraan
-
23 apr
projectiel 8
-
23 apr
Verschil tussen deze 2 vragen 5
-
23 apr
[scheikunde] berekeningen labo vitamine c bepaling 1
-
22 apr
[wiskunde] rode en witte ballen verdelen 8
-
22 apr
Rotatie van het heelal 41
-
22 apr
Muntje opgooien 14
-
21 apr
Reactiviteit silyl enol ethers 1
-
21 apr
Criterium voor vochtretentie
-
21 apr
speciale rel. theorie 5
-
21 apr
Vogels in de stad zijn goede klussers
-
21 apr
Ervaringen met "herontdekkingen" 15
Nieuwsberichten
-
04 mar
Een nieuw soort magnetisme: altermagnetisme
-
31 okt
AI kan via stem diabetes vaststellen 11
-
21 okt
Einstein krijgt wéér gelijk 45
-
07 feb
witter dan wit 20
-
19 jun
irrigatie en de aardas
RNA
Moderator: ArcherBarry
-
- Berichten: 18
Re: RNA
Hoi,
Volgens mij kun je de dalton niet bepalen zonder een marker.
Ik heb op school een aantal elektroforesen uitgevoerd en dat was telkens met een marker.
Van die marker heb ik een ijklijn gemaakt en uit de vergelijking van de ijklijn het aantal dalton van het DNA,RNA bepaald.
Er is misschien wel een andere manier om de dalton te bepalen, maar uit de elektroforese zonder marker ga je volgens mij geen dalton kunnen bepalen.
MVG
Caroline
Volgens mij kun je de dalton niet bepalen zonder een marker.
Ik heb op school een aantal elektroforesen uitgevoerd en dat was telkens met een marker.
Van die marker heb ik een ijklijn gemaakt en uit de vergelijking van de ijklijn het aantal dalton van het DNA,RNA bepaald.
Er is misschien wel een andere manier om de dalton te bepalen, maar uit de elektroforese zonder marker ga je volgens mij geen dalton kunnen bepalen.
MVG
Caroline
-
- Berichten: 592
Re: RNA
S van Svedbergmisschien een stomme vraag...je drukt het toch uit in Da niet in s? s ken ik alleen als seconde...en dat bedoel je vast niet.
een sedimentatiecoëfficient of zoiets
eukaryotisch ribosoom bestaat uit 2 delen
een van 40S en een van 60S denkik
en daarin zitten dan weer korte rRNA strengen met ook elk hun Svedbergwaarde
het volledig ribosoom is 80S
-
- Berichten: 592
Re: RNA
RNA en svedberg waarden
hier vind je welk deel van je ribosoom welke rRNA delen bevat
28S, 5.8S en 5S in het 60S gedeelte
18S in het 40S deel
in m'n cursus moleculaire biologie staat het nog beter uitgelegd
maar ik kan die moeilijk opsturen hé
hier vind je welk deel van je ribosoom welke rRNA delen bevat
28S, 5.8S en 5S in het 60S gedeelte
18S in het 40S deel
in m'n cursus moleculaire biologie staat het nog beter uitgelegd
maar ik kan die moeilijk opsturen hé
-
- Berichten: 20
Re: RNA
??
Het nagaan van de aanwezigheid van de 28S , 18S en 5S ribosomaal RNA heeft toch niet zozeer betreking tot de hoeveelheid RNA, kan misschien wel gelinkt worden aan het aantal Dalton van uw staal, maar is oorspronkelijk toch niet de bedoeling.
Adhv de detectie van de ribosomale subeenheden kan men wel checken of er tijdens de RNA isolatie geen RNA is afgebroken. Zonder RNA kan men namelijk geen cDNA synthese starten. Vandaar dat men eerst de kwaliteit van het geïsoleerde RNA checkt adhv detectie van de ribosomale subeenheden. Zijn deze niet terug te vinden kan je besluiten dat je RNA is afgebroken door RNase en heb je bijgevolg geen template voor de cDNA synthese.
Om een idee te krijgen over het aantal Dalton RNA van uw kan je best een merker mee laten lopen. Detectie van de ribosomale subeenheden is kwalitatief en niet kwantitatief
Heb tijdens mijn thesis jaar PCR en 5' RACE reacties uitgevoerd. RNA geïsoleerd en omgezet tot cDNA.
Het is een tijdje geleden, maar deze redenering heb ik er nu aan over gehouden
Groet
Het nagaan van de aanwezigheid van de 28S , 18S en 5S ribosomaal RNA heeft toch niet zozeer betreking tot de hoeveelheid RNA, kan misschien wel gelinkt worden aan het aantal Dalton van uw staal, maar is oorspronkelijk toch niet de bedoeling.
Adhv de detectie van de ribosomale subeenheden kan men wel checken of er tijdens de RNA isolatie geen RNA is afgebroken. Zonder RNA kan men namelijk geen cDNA synthese starten. Vandaar dat men eerst de kwaliteit van het geïsoleerde RNA checkt adhv detectie van de ribosomale subeenheden. Zijn deze niet terug te vinden kan je besluiten dat je RNA is afgebroken door RNase en heb je bijgevolg geen template voor de cDNA synthese.
Om een idee te krijgen over het aantal Dalton RNA van uw kan je best een merker mee laten lopen. Detectie van de ribosomale subeenheden is kwalitatief en niet kwantitatief
Heb tijdens mijn thesis jaar PCR en 5' RACE reacties uitgevoerd. RNA geïsoleerd en omgezet tot cDNA.
Het is een tijdje geleden, maar deze redenering heb ik er nu aan over gehouden
Groet
-
- Berichten: 337
Re: RNA
De zuiverheid van je preparaat bepaal je met de Nanodrop (eiwitcontaminatie)
De gelelectroforese die je beschrijft is inderdaad van de 28S/18S rRNA ratios.
Aangezien dit de meest voorkomende RNA's in cellen zijn en deze subunits idealiter een vaste ratio hebben (oppv) kun je aan de hand van gelelectroforese iets zeggen over de kwaliteit van bijv mRNA, dat maar 1-5% uitmaakt van je totale RNA populatie, maar beter is nog capillaire electroforese (Bioanalyzer).
Bij gel electroforese hoort je 28S bandje ongeveer 2x zo dik als je 18S bandje te zijn
De gelelectroforese die je beschrijft is inderdaad van de 28S/18S rRNA ratios.
Aangezien dit de meest voorkomende RNA's in cellen zijn en deze subunits idealiter een vaste ratio hebben (oppv) kun je aan de hand van gelelectroforese iets zeggen over de kwaliteit van bijv mRNA, dat maar 1-5% uitmaakt van je totale RNA populatie, maar beter is nog capillaire electroforese (Bioanalyzer).
Bij gel electroforese hoort je 28S bandje ongeveer 2x zo dik als je 18S bandje te zijn
