Zuiveren DNA

Moderator: ArcherBarry

Reageer
Berichten: 8

Zuiveren DNA

Hoi iedereen,

Ik heb een vraagje over het zuiveren van plasmide DNA met behulp van een kit.

Onder de aanwezigheid van chaotropische zouten bindt het plasmide DNA aan het silicamembraan van de kolom maar wat/hoe gebeurt dit dan?

Het plasmide DNA wordt uiteindelijk van de kolom geëlueerd met een licht alkalische buffer onder lage ionische condities, hoe gebeurt dit?

Tenslotte: als poly ethyleen glycol wordt gebruikt bij de directe zuivering van PCR producten, hoe komt het dan dat lange DNA fragmenten hierdoor worden neergeslagen en korte fragmenten, primers, DNTPs, buffers en enzymen in oplossing blijven?

Ik hoop dat iemand mij hierbij kan helpen 8-)

Berichten: 740

Re: Zuiveren DNA

Ik gebruik de plasmide purification kit van Qiagen.

Op de website (www.qiagen.nl) staat een handleiding waarin staat hoe de kollom precies werkt.

Berichten: 8

Re: Zuiveren DNA

Ik maak gebruik van de kit van Machery-Nagel.

Op de site staat inderdaad hoe de kolom werkt maar ik zou graag de preciese reacties weten van binding en elutie?

En ook de werking van poly ethyleen glycol is me niet helemaal duidelijk.

Groetjes

Berichten: 740

Re: Zuiveren DNA

polyetheleen zal wel een bepaalde affiniteit hebben voor het DNA net als sillica.

Doordat het DNA negatief geladen is bindt dit vaak aan een positieve groep.

Door de zout concentraties te veranderen verzwakt of versterkt dit de binding aan de kollom.

De reactie precies weet ik niet, dit ligt aan de kollom die wordt gebruikt.

Reageer