UV-detectie

Moderator: ArcherBarry

Reageer
Berichten: 4

UV-detectie

Hey, kan mij iemand vertellen waarom de UV-detectie bij HPLC bij 214 nm en 280 nm gemeten wordt?

groetjes

Gebruikersavatar
Berichten: 6.853

Re: UV-detectie

Wat absorbeert er bij deze golflengten?

Berichten: 4

Re: UV-detectie

Die vraag heb ik gesteld i.v.m. mijn stage. Het was de bedoeling eiwitten die voorkomen in de kop van de honingbij te identificeren d.m.v HPLC.

groetjes

Gebruikersavatar
Berichten: 6.853

Re: UV-detectie

Ik herhaal mijn wedervraag. Wat zit er in die eiwitten dat absorbeert bij 280nm?

Berichten: 59

Re: UV-detectie

Om even correct te zijn: er wordt niet alleen bij deze twee golflengten gemeten als je praat over UV-detectie bij HPLC. Waarschijnlijk bedoel je het niet zo, maar zo staat het er wel.

Berichten: 4

Re: UV-detectie

Er werd een chromatogram weergegeven van de meting bij 214 nm en 280 nm. Mijn begeleidster zei dat dit een mogelijke vraag kon zijn op de verdediging maar kon het geen antwoord zijn. ze dacht dat het iets te maken had met de aromatische groepen ofzo.

Berichten: 1.122

Re: UV-detectie

Je kiest de golflengte zo, dat je molecuul ten eerste absorbeert bij die golflengte. En ten tweede kies je het liefst een golflengte die zo specifieke mogelijk is voor je te analyseren molecuul.

Als je molecuul dus karakteristieke groepen bevat dan is het dus het meest logisch om je golflengte daar op `af te stemmen´.

214nm lijkt mij niet zo´n selectieve golflengte. Bij 214nm absorbeert zo´n beetje alles.... 8-)

Berichten: 2.399

Re: UV-detectie

Bij 214 meet je de absorptie van de protein backbone. Dit is zeer gebruikelijk, niet ieder proteine heeft bijvoorbeeld een aromatisch aminozuur etc. Het signaal van de backbone is zowiezo sterker.

Bij 280 meet je specifiek naar iets. Ik neem aan dat iemand op je stage bedrijf wel weet waarom er daar gemeten wordt, je bent naar iets specifieks op zoek iig.

Gebruikersavatar
Berichten: 11.177

Re: UV-detectie

Volgens mij heb je het zelf al eens gezegd.

Berichten: 4

Re: UV-detectie

Ik hetzelf al gezegd?

Berichten: 2.399

Re: UV-detectie

Ik snap de opmerking van FSWD ook niet. Als je doelt op de aromaten die genoemd zijn, die absorberen standaard bij 254, dus er wordt hoogstens naar een aromaat gemeten met zekere functionele groep er aangebonden.

Gebruikersavatar
Berichten: 6.853

Re: UV-detectie

http://www.ibivu.cs.vu.nl/teaching/masters...pectroscopy.pdf

Tryptofaan zit bovenop die 280nm. Bij ~210 zit de backbone inderdaad. De waarde van precies 214 nm zal waarschijnlijk komen door de sterke emissie van een Zn lamp op die lijn. Daar is tenminste via google een hoop over te lezen.

Berichten: 2.035

Re: UV-detectie

Klopt helemaal! 8-)

De meest gebruikte lampen zijn:

Kwik: 254 nm

Cadmium: 225 nm

Zink: 214 nm

Toevoeging: UV-absortie van eiwitten komt van de tyrosine- en tryptofaan-groepen (en in mindere mate van fenylalanine-goepen en disulfide-bruggen).....

Reageer