[scheikunde] Tris-buffer

Moderators: ArcherBarry, Fuzzwood

Reageer
Berichten: 18

[scheikunde] Tris-buffer

Ik heb een proef waarbij ik de specifieke activiteit van een protease-preparaat moet meten. Nu gebruik ik een Tris-buffer, maar wat is dit en wat doet deze buffer nu eigenlijk??

Hoe maak ik een protease-preparaat van 0.1 IU/ml ?????

Alvast bedankt,

Re: [scheikunde] Tris-buffer

Tris is a chemical with basic properties, having a pKa of 8.1. It can be used to buffer solutions from drastic pH changes, keeping them in the pH range of 7.0 to 9.0.

Belangrijke toepassing als elektroforesebuffer in polyacrylamide en agarosegel-ektroforese

Tris(hydroxymethyl)aminomethane

protease-preparaat van 0.1 IU/ml

Op je preparaat is de activiteit vermeld en dan verdunnen met bijv. PBS (fosfaat gebufferde fysiologisch zout oplossing) met 3% BSA (bovine serum albumin) maar volg je voorschrift.

Berichten: 125

Re: [scheikunde] Tris-buffer

Wel oppassen met het stellen van de pH van een Tris-buffer. Deze is namelijk extreem temperatuur afhankelijk. Dus de pH stellen bij gebruikstemperatuur.

sjouke

Berichten: 18

Re: [scheikunde] Tris-buffer

Bedankt voor de reacties.

Helaas staat alleen in mijn voorschrift dat ik een protesse-preparaat moet maken. Het hoe staat er helaas niet bij en mijn leraar weigert het uit te leggen. Ik kan het ook niet vinden op internet hoe ik zo'n protease-preparaat moet maken.

Weet iemand misschien hoe dit moet of waar ik het op internet kan vinden??

Alvast bedankt,

Re: [scheikunde] Tris-buffer

Protease is een klasse van eiwitsplitsende enzymen die overal voorkomen en de preparaat bereiding hangt af van de bron waar het in voor komt.

Kun je de context van je proef beschrijven misschien kunnen we je dan verder helpen.

Berichten: 18

Re: [scheikunde] Tris-buffer

De protease-preparaten kan ik van een flesje halen die op school staat. en dan maak ik enzymoplossingen van 0.1 IU/ml 0.2 IU/ml en 0.3 IU/ml deze moeten in een Tris-buffer. Hoe ik dit moet doen staat niet in mijn voorschrift.

Van elke enzympreparaatoplossing pipetteer ik 1.0ml in een buis. hier voeg ik 5.0ml caseïne-oplossing aan toe. Ik meng dit op de vortexmixer en dan incubeer ik het bij 35°C voor exact 30 minuten.

Ik stop de reactie met TCA 50g/L

Ik meet bij een extictie van 280nm de heldere vloeistof die ik van hierboven heb verkregen en als referentie-oplossing heb ik tyrosine-oplossing.

Maar nu weet ik dat ik een hoeveelheid protease inweeg. Moet ik dit dan oplossen in de Tris-buffer of gebruik ik een andere vloeistof???

Alvast bedankt voor alle hulp....

Berichten: 18

Re: [scheikunde] Tris-buffer

Ow ja ik moet dan uiteindelijk berekenen de specifieke activiteit van het protease-preparaat. Kan iemand mij hiermee opweg helpen. Er staan geen formule bij waarbij ik het kan uitrekenen...

Reageer