housekeeping gene

Moderator: ArcherBarry

Reageer
Berichten: 21

housekeeping gene

Beste mensen,

Ik ben bezig met het ontwerpen van primers voor een positieve controle pcr, welke ik draai met 5 verschillende bacterien. Deze primers wil ik ontwerpen voor een housekeeping gene die in alle 5 voorkomt. Ik ben al een tijd aan het zoeken, maar ik kan maar geen gen vinden. Kan iemand mij helpen.

Bedankt

Gebruikersavatar
Berichten: 2.330

Re: housekeeping gene

Ik heb even wat meer informatie nodig. Welke bacterie stammen heb je? Dan kunnen we wat gerichter zoeken.

MvG Ron

Berichten: 21

Re: housekeeping gene

Dit zijn de bacterien

MRSA

S. aureus

Legionella pneumophila

Klebsiella pneumoniae

Salmonella choleraesuis

Gebruikersavatar
Berichten: 2.330

Re: housekeeping gene

MRSA is S. Aureus die meticilline-resistent is. Het huishoudgen voor deze stam is pta .

pta FP: AGAAGCAATCATTGATGGCGA RP: ACCTGGCGCTTTTTTCTCAG

Legionella pneumophila gevonden huishoudgenen.

acn, asd, rpoB

Klebsiella pneumoniae gevonden huishoudgenen

gyrA, mdh

Salmonella choleraesuis gevonden huishoudgenen

CD47/IAP, CXCL10 and SCARB2

Ik kom nergens dezelfde huishoud genen tegen misschien kun je een paar testen op homogenesis.

MvG Ron

Berichten: 21

Re: housekeeping gene

Bedankt

Maar ik zoek eigenlijk 1 gen welke in alle 5 voorkomt zodat 1 primerset afdoende is.

Berichten: 740

Re: housekeeping gene

Mag het alleen positief zijn voor deze bacterien?

Dan wordt het vrij lastig...

Zelf denk ik dat het niet eens mogelijk is...

Je zal dan je product moeten sequencen.

Berichten: 21

Re: housekeeping gene

Nee, het hoeft niet alleen positief te zijn voor deze bacterien. Het gen mag ook in andere bacterien voorkomen. Als het maar in ieder geval in deze 5 voorkomt. Zodat aangetoond kan worden dat er opzich DNA in oplossing aanwezig is.

Berichten: 740

Re: housekeeping gene

Voor identificatie van bacterien wordt altijd een deel van het rRNA gen gepakt.

Deze is voor elke soort anders maar kan wel met dezelfde primers worden geamplificceerd. Door het gevormde product te sequencen en te blasten kun je vervolgens de bacterie identificeren.

Berichten: 21

Re: housekeeping gene

Voor de positieve controle is het niet nodig om bacterien te identificeren. Ik moet alleen een primerset hebben welke in alle 5 bacterien een stuk dna kan amplificeren, zodat ik kan aantonen dat er dna aanwezig is.

Berichten: 740

Re: housekeeping gene

Tja, dat moet je denk ik toch zelf uitzoeken door primers te maken voor genen die bij elke bacterie aanwezig zijn, dit zullen er vast een hoop zijn, maar de sequentie kan toch verschillen per stam.

Ik weet zo gauw geen site oid waar je dit kan vinden.

Reageer