eGFP met ander UTR in plasmide

Moderator: ArcherBarry

Reageer

Bericht 10-04-'08, 20:23

mochila

Berichten: 167

eGFP met ander UTR in plasmide

Ik zou graag een GFP eiwit fusioneren met het 3'UTR deel van een ander mRNA. Hoe kan ik van de 3'UTR site van het mRNA koppelen aan GFP om het vervolgens in een plasmide te steken.
“Twenty years from now you will be more disappointed by the things that you didn't do than by the ones you did do. So throw off the bowlines. Sail away from the safe harbor. Catch the trade winds in your sails. Explore. Dream. Discover.”
Omhoog

Bericht 10-04-'08, 22:25

Roy van Heesbeen

Berichten: 740

Re: eGFP met ander UTR in plasmide

PCR beide fragmenten (UTR en GFP) en introduceer restrictiesites aan de fragmenten indien nodig (GFP kan je ook gewoon uit de vector knippen).Gebruik voor zowel het einde van de UTR als voor het begin GFP dezelfde RE site.

Digesteer nu beide fragmenten voor het verkrijgen van sticky-ends en voer een 3punts ligatie uit.
Omhoog
Reageer

Terug naar “Moleculaire biologie en biochemie”