Springen naar inhoud

[scheikunde] Extraheren v honing


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Garmt

    Garmt


  • 0 - 25 berichten
  • 6 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 16 november 2008 - 13:14

Hallo,

Voor een presentatie op school moet ik pesticiden kwantitatief en kwalitatief bepalen uit honing. Ik zit wat in de knoop met het extraheren. De GC-MS analyse erna lukt wel.

ik heb wat gevonden uit proefverslagen op internet.

Honey was heated in a water bath at 50C for 15 min
to facilitate its manipulation.
-> wat bedoelen ze met 'facilate it's manipulation'?

die oplossing was dissolved in 10 mL of watermethanol (7:3, v/v)
-> waarom net methanolwater oplossing voor honing?

Dan wordt het over een propyleenkolom gedaan met 1g C18.
->Is die propyleenkolom belangrijk?

En benk ik juist: de pesticiden zullen op de vaste fase van de kolom komen. hierna wordt met een eluens de pesticiden uit de kolom gezuiverd.
-> dat eluens, dat moet ervoor zorgen dat de pesticiden beter bindt als aan de vaste fase (C18)? Maar wilt dat niet zeggen dat je voor elk specefiek pesticde een andere kolom moet hebben?

En indien u iets weet dat ik vergeet bij de extractie, laat me maar weten.

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Marjanne

    Marjanne


  • >1k berichten
  • 4771 berichten
  • VIP

Geplaatst op 16 november 2008 - 13:24

Honey was heated in a water bath at 50C for 15 min
to facilitate its manipulation.
-> wat bedoelen ze met 'facilate it's manipulation'?


Honing is bij kamertemperatuur nogal stroperig... Je hebt zelfs honings die vrijwel vast zijn.

die oplossing was dissolved in 10 mL of watermethanol (7:3, v/v)
-> waarom net methanolwater oplossing voor honing?


In deze oplossing lost honing kennelijk goed op. Ik zou zelf op voorhand puur water nemen, maar ik moet bekennen dat ik nog nooit honing heb gextraheerd.
Verder wil je de aanwezige bestrijdingsmiddelen graag in de oplossing houden. Vandaar, denk ik, de toevoeging van methanol.

En benk ik juist: de pesticiden zullen op de vaste fase van de kolom komen. hierna wordt met een eluens de pesticiden uit de kolom gezuiverd.
-> dat eluens, dat moet ervoor zorgen dat de pesticiden beter bindt als aan de vaste fase (C18)? Maar wilt dat niet zeggen dat je voor elk specefiek pesticde een andere kolom moet hebben?


Je benkt juist.
Je hoeft niet voor elk specifiek pesticide een aparte kolom te hebben. Een kolom is meestal geschikt voor een bepaalde polariteit van verbindingen (in dit geval pesticiden). Je kunt met een kolommetje dus een hele groep pesticiden met een bepaalde polariteit extraheren.
Als ik me goed herinner, is C-18 een kolommateriaal dat geschikt is voor een hele brede groep.

#3

Garmt

    Garmt


  • 0 - 25 berichten
  • 6 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 16 november 2008 - 13:31

bedankt. en aangezien C18 polair is (toch?) zijn de pesticden ook polair, maar zal het eluens meer polair moeten zijn om ze te laten binden?

#4

Marjanne

    Marjanne


  • >1k berichten
  • 4771 berichten
  • VIP

Geplaatst op 16 november 2008 - 13:35

Ik denk dat C18 juist apolair is. En dus zullen ook die pesticiden wat meer apolair zijn dan polair. Anders hoefde je die methanol niet bij het oplosmiddel te voegen.

Als de pesticiden op de kolom zitten, zul je ze er dus met een heel apolair eluens vanaf moeten halen. Welk eluens is er voorgeschreven?

#5

Garmt

    Garmt


  • 0 - 25 berichten
  • 6 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 16 november 2008 - 13:53

hexane-ethyl acetate (1:1, v/v)

EDIT:

ik was nu met de GC bezig. en ze zeiden dat de stationaire fase apolair was.(5% phenyl polysiloxane as nonpolar stationary phase)
Dus je had idd gelijk. de pesticden zullen apolair zijn.


hartelijk bedankt voor de hulp!!!

Veranderd door Garmt, 16 november 2008 - 14:33


#6

sytskedj

    sytskedj


  • 0 - 25 berichten
  • 1 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 12 april 2017 - 16:27

Hallo, 

 

Wij doen voor ons PWS onderzoek naar biologische honing in Nederland. Wij willen door middel van gaschromatografie pesticiden aantonen in de honing, maar wij stuiten hierbij op een paar problemen.

 

1. Is het nodig om vooraf te extraheren, en zo ja waarom?

 

2. Naar welke pesticide kunnen wij het beste onderzoek doen?

 

3. Op welke temperatuur moet de kolom tijdens de GC?

 

Hopelijk kunnen jullie ons hiermee verder helpen!

 

Groeten, 

 

Sytske de Jong en Masha Tippersma


#7

NW_

    NW_


  • >250 berichten
  • 610 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 12 april 2017 - 17:28

Enkel gaschromatografie zal niet volstaan. Pesticides zullen slechts in zeer lage concentraties voorkomen (microgram per liter range) of misschien zelfs lager, zeker als dit over biologische honingsoorten gaat, waar idealiter geen pesticides zouden mogen inzitten. Daarom zul je gaschromatografie met massaspectrometrie, kortweg GC-MS, nodig hebben. Met GC kun je niets doen, of je zult zeer sterk moeten opconcentreren.

Welke pesticides je best kunt bepalen weet ik niet direct. Zoek daarom op in de wetenschappelijke literatuur welke pesticides vaak gedetecteerd worden in honing.

Eens je je componenten gekozen hebt zul je inderdaad een extractieprocedure moeten ontwikkelen. Je kunt immers niet zomaar de honing 'eventjes in de GC-MS injecteren'. Grofweg zijn er twee procedures die vaak toegepast worden: 1) liquid-liquid extraction (LLE) en 2) solid-phase extraction (SPE). In het algemeen is SPE zeer tijdsrovend in vergelijking met LLE.

Vooraleer je LLE toepast, maak je best eerst een honingoplossing in water. Los (bvb) 10 mg op in 10 ml. (1 g/l). Dit moet je nu gaan verdunnen (verdunning experimenteel bepalen) en vervolgens extraheren. Persoonlijk gebruik ik altijd dichloromethaan om extracties uit te voeren, wat zeer goed werkt voor het isoleren van pesticides uit waterige oplossingen. Gebruik het volgende protocol:

- Voeg 1 mL dichloromethaan toe aan 20 ml honingstaal.
- Schud gedurende 10 minuten
- Laat ontmengen
- Breng de organische fase over in een GC-MS vial en injecteer.

Welk ovenprogramma je moet instellen is moeilijk in te schatten. Het optimale programma hangt o.a. af van het type pesticides dat je wilt bepalen. Ik zou je aanbevelen om uit te gaan van een ovenprogramma met lage intiele temperatuur, een breed temperatuursbereik en een trage opwarmsnelheid, bvb:

Initiele oventemperatuur: 70 C
Opwarmsnelheid: 5 C/min
Eindtemperatuur: 300 C

Injectietemperatuur kun je op 250 C plaatsen.

Als je goed resultaat bereikt (je pieken van interesse kunt detecteren) kun je gaan optimaliseren.

#8

Benm

    Benm


  • >5k berichten
  • 9345 berichten
  • VIP

Geplaatst op 13 april 2017 - 01:12

Dat kan inderdaad, maar als je de pesticiden ergens kunt verkrijgen is het wel een stuk gemakkelijker om je methode te optimaliseren, en de resulaten kwantitatief te maken. 

 

Veel heb je er niet voor nodig, wellicht kan iemand die ze gebruikt (een boer oid?) je wel aan een sample helpen - je hebt meer dan genoeg aan een mililiter als het in een verpakking van een liter komt. Sterker nog, als je gewoon een 'lege' fles van het pesticide hebt zit daar nog meer dan genoeg aan de wand voor al je experimenten. 

Victory through technology

#9

Thionyl

    Thionyl


  • >1k berichten
  • 1629 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 13 april 2017 - 10:28

Of je er wat aan hebt? Maar ca 40 j geleden deden wij vaak kleine onderzoekjes oa naar pesticiden enz. in zg onbespoten groente.  Maar de precieze wijze weet ik niet meer, moet uit 't geheugen. Als het dus enigszins in jouw richting komt en te doen is, dan ga ik er wel dieper over nadenken. Dit staat me nog bij. 

 

Truc was om via dunne laag chromatografie de pesticiden te identificeren. Eluens staat me niet meer bij, sorry.

We gebruikten een enzym uit vliegenkoppen er voor. Potje vliegen gehaald, verdoofd met ether en de koppen verzameld. De koppen samen met wat groente??)  werden vermalen mbv vloeibare stikstof, in een mortier.   

Op de dunne laag Silicagel gebracht enz. om te scheiden en na droging?? bespoten met een Ninhydrine oplossing en onder UV bekeken. Weet niet meer of er ook een referentie mee liep, zal haast wel. 

 

Hoe dan ook, er kwam uit dat ook zg onbespoten groente vol zat met pesticiden.

 

Hoor het wel. 

LiA


#10

Benm

    Benm


  • >5k berichten
  • 9345 berichten
  • VIP

Geplaatst op 13 april 2017 - 13:42

Dat is wel een heel bijzonder protocol, vraag me wat er in vliegenkoppen zit dat van nut is voor dit experiment. 

 

Stainen met ninhydrin toont voor zover mij bijstaat vooral eiwitten (of uberhaupt aminogroepen) aan, maar is niet bijster specifiek. Wellicht dat het voor bepaalde pesticiden werkt, maar dan moet je weten wat je zoekt (dat is sowieso wel handig). 

Victory through technology

#11

Thionyl

    Thionyl


  • >1k berichten
  • 1629 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 13 april 2017 - 16:32

Wat er in zit? Wel een enzym dat iets doet, of koppelt met pesticiden, ofzo. Tenslotte kunnen ze? DDT ook onschadelijk maken. Was best  grappig,  omdat de vliegen nog wel eens ontwaakten enz. tijdens het proces van onthoofding. De vliegen kwamen van het BCP Jansen-instituut te A'dam. Daar zullen ze ook wel meer weten erover. Ik zit niet zo in biochemie, was toen praktikum-ass. op de UvA, maar organisch gericht.  

LiA


#12

Benm

    Benm


  • >5k berichten
  • 9345 berichten
  • VIP

Geplaatst op 15 april 2017 - 01:38

Zoiets zal het wel zijn inderdaad, veel pesticide zijn neurotoxines, dus ik kan me wel voorstellen dat die goed binden met receptoren in een vliegenkop, wellicht zodanig goed dat ze met receptor en al de chromatografie in gaan en dan met ninhydrine te markeren zijn. 

 

Enige dat ik me afvraag aan die theorie: hoe zie je of er wel of geen pesticide aan die receptor zit? Qua massa is de receptor zoveel zwaarder dan het praktisch geen verschil maakt, en ninhydrine zal de receptor stainen of er nou een pesticide aan zit of niet. 

 

Evenwel een bijzondere materials and methods, ik heb nog nooit iets gezien waarbij ik vliegenkoppen nodig had (wel een liter of wat paardenbloed trouwens, dus zo idioot klinkt het ook weer niet ;) ). 

Victory through technology





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures