Hoi!
Ik ben bezig met de qPCR en is er van een aantal monsters een smeltcurve bepaald, natuurlijk wil ik graag weten of deze monsters primer-dimeren vormen of dat er ook daadwerkelijk PCR product is geamplificeerd.
De primer die gebruikt is TH01 met zijn Tm-waarden: A-> Tm=62 en B->Tm=79
- Nu heb ik een grafiek gekregen waarvan meerdere monsters eendezelfde piek vertonen, deze ligt bij een melttemperature van 77,0.
- 1 monster geeft een piek bij 74,50
- een andere monster een piek bij 75,0
Ik weet niet hoe ik deze data kan analyseren, kan iemand mij helpen?
Is dit voldoende informatie?
Laatste berichten
-
23:25
2013 – Augustus Vraag 3
-
23:07
Rood laserlicht 2
-
23:04
Bruine vlekken op treinaanwijzerbord 5
-
15:28
Vraag 2009 Juli Vraag 5 5
-
12:51
positie 2
-
10:44
Schroefdraad berekening 8
-
24 apr
[scheikunde] Kan chloorgas de geleiding van elektriciteit belemmeren? 9
-
23 apr
Weerfrustratie 9
-
23 apr
geen minkowski-ruimte toch? Doe ik dit nou fout? 15
-
23 apr
do-re-mi-fa-so vliegtuigen 7
-
23 apr
Kunnen quantum Zonnecellen 190% quantum efficiënt zijn 3
-
23 apr
De Euro Nederlandse 100 qubit computer komt eraan
-
23 apr
projectiel 8
-
23 apr
Verschil tussen deze 2 vragen 5
-
23 apr
[scheikunde] berekeningen labo vitamine c bepaling 1
-
22 apr
[wiskunde] rode en witte ballen verdelen 8
-
22 apr
Rotatie van het heelal 41
-
22 apr
Muntje opgooien 14
-
21 apr
Reactiviteit silyl enol ethers 1
-
21 apr
Criterium voor vochtretentie
Nieuwsberichten
-
04 mar
Een nieuw soort magnetisme: altermagnetisme
-
31 okt
AI kan via stem diabetes vaststellen 11
-
21 okt
Einstein krijgt wéér gelijk 45
-
07 feb
witter dan wit 20
-
19 jun
irrigatie en de aardas
Smeltcurve analyse
Moderator: ArcherBarry
-
- Berichten: 1.379
Re: Smeltcurve analyse
Neen, niet voor mij. Ik kan uit Uw bericht niet opmaken welke stof of welk stofmengsel U aan het smelten bent. Evenmin kan ik begrijpen in welke grafiek U pieken krijgt. Betreft het een thermoanalytisch onderzoek aan een mengsel van stoffen?
Uitleggen is beter dan verwijzen naar een website
-
- Berichten: 78
Re: Smeltcurve analyse
Hoi!!
Ik heb DNA geisoleerd uit bloed, ik wil een bepaald locus amplificeren met de marker/primer TH01. Met deze smeltcurve wil ik bepalen of de primers geen dimeren met elkaar hebben gevormd en dus of de fluorescentie die gemeten wordt afkomstig is van mijn DNA-template en niet van mogelijk gevormde primer dimeren.
Ik gebruik SYBR Green, dit straalt fluoresentie af bij ieder dubbelstrengsDNA, dus ook bij primer dimeren. Nu kan er met de smeltcurve bepaald worden of je ook daadwerkelijk PCR-product hebt zonder het te elektroforeren. Maar ik weet dus niet hoe ik dit moet doen..
Ik heb DNA geisoleerd uit bloed, ik wil een bepaald locus amplificeren met de marker/primer TH01. Met deze smeltcurve wil ik bepalen of de primers geen dimeren met elkaar hebben gevormd en dus of de fluorescentie die gemeten wordt afkomstig is van mijn DNA-template en niet van mogelijk gevormde primer dimeren.
Ik gebruik SYBR Green, dit straalt fluoresentie af bij ieder dubbelstrengsDNA, dus ook bij primer dimeren. Nu kan er met de smeltcurve bepaald worden of je ook daadwerkelijk PCR-product hebt zonder het te elektroforeren. Maar ik weet dus niet hoe ik dit moet doen..
-
- Berichten: 1.379
Re: Smeltcurve analyse
Bedankt, een beetje uitleg was wel nodig. Uw werk is verregaand specialistisch. Hopenlijk treft U op dit forum nog een collega met DNA ervaring.
Uitleggen is beter dan verwijzen naar een website
