Hallo,
Ik weet niet of dit de juiste plaats is voor volgende vraag, maar misschien kan er toch iemand me verder helpen.
Ik heb een LC-MS/MS methode voor 2 basische componenten geoptimaliseerd (C18 kolom, gradient met A water met 25mM ammoniumformaat op pH 3 en B MeOH en 0.1% mierenzuur). Deze werkt mooi voor de standaardoplossing.
Nu heb ik een SPE-method op Bond Elut Certify kolommen (mixed mode SPE) die ik zou willen gebruiken voor analyse van urine en bloed.
Ik zit echter met volgend probleem.
Ik doe de SPE met blanco water (dus conditioneren, wassen, en dan elutie zonder dat de eigenlijk componenten aanwezig zijn), het gelueerde solvens damp ik dan in. Wanneer ik hieraan na het indampen dan de standaardoplossing toevoeg en deze injecteer zie ik een signaal verlies tussen 25- en 50% vergeleken met de injectie van pure standaard!!
Wanneer ik simpleweg het elutiesolvent indamp en dan standaard aan toevoeg, zie ik een verlies van 5-10% (wat kan verklaard worden door overbrengen enz).
Heeft er iemand dit probleem ook? Wat zou ik eraan kunnen doen?
Alvast bedankt!
Laatste berichten
-
23:56
[scheikunde] berekeningen labo vitamine c bepaling
-
22:05
projectiel 7
-
21:51
geen minkowski-ruimte toch? Doe ik dit nou fout? 10
-
21:48
Verschil tussen deze 2 vragen 4
-
19:29
[wiskunde] rode en witte ballen verdelen 8
-
17:23
Rotatie van het heelal 41
-
12:15
Weerfrustratie 5
-
11:55
Muntje opgooien 14
-
21 apr
Reactiviteit silyl enol ethers 1
-
21 apr
Criterium voor vochtretentie
-
21 apr
speciale rel. theorie 5
-
21 apr
Vogels in de stad zijn goede klussers
-
21 apr
Ervaringen met "herontdekkingen" 15
-
20 apr
Herleiden afmetingen vanaf een foto 19
-
20 apr
Stank rotte eieren uit de warmwaterboiler 11
-
20 apr
Nut warmtepomp 18
-
20 apr
Airco bevriezings kans berekenen. 17
-
19 apr
Ik wil studeren via afstandsonderwijs, kennen jullie Tech?
-
18 apr
hall effect in vloeistof gebruiken als stromingssensor 6
-
18 apr
Gezocht: de/een naam voor een getallenrij met een cauchyrij als partieelsommenrij
Nieuwsberichten
-
04 mar
Een nieuw soort magnetisme: altermagnetisme
-
31 okt
AI kan via stem diabetes vaststellen 11
-
21 okt
Einstein krijgt wéér gelijk 45
-
07 feb
witter dan wit 20
-
19 jun
irrigatie en de aardas
SPE - verlies van signaal
Moderator: ArcherBarry
-
- Berichten: 2.399
Re: SPE - verlies van signaal
Hoe elueer je de analieten en wat zijn deze precies? LAgere recoveries zijn niet zo'n probleem mits het lineair is en reproduceerbaar.
Als je niet alle details geeft, blijft het koffiedik kijken.
Als je niet alle details geeft, blijft het koffiedik kijken.
-
- Berichten: 5
Re: SPE - verlies van signaal
Hallo,
Ik heb het al eens geprobeerd met 2 elutiosolventen (gebaseerd op literatuur voor de elutie van basische componenten op mixed-mode SPE):
1) 2/10/88 NH4OH / ACN / ethylacetate
2) 2/20/78 NH4OH /isopropanol/ CH2Cl2
Beide gaven hetzelfde resultaat.
Het probleem is dat ik nog niet eens aan recovery toe ben, de componenten elueren niet van de kolom maar worden pas toegevoeg na indampen van het elutiosolvent en dan heb ik al een signaalverlies!!!
Alvast bedankt voor je advies!
Ik heb het al eens geprobeerd met 2 elutiosolventen (gebaseerd op literatuur voor de elutie van basische componenten op mixed-mode SPE):
1) 2/10/88 NH4OH / ACN / ethylacetate
2) 2/20/78 NH4OH /isopropanol/ CH2Cl2
Beide gaven hetzelfde resultaat.
Het probleem is dat ik nog niet eens aan recovery toe ben, de componenten elueren niet van de kolom maar worden pas toegevoeg na indampen van het elutiosolvent en dan heb ik al een signaalverlies!!!
Alvast bedankt voor je advies!
-
- Berichten: 306
Re: SPE - verlies van signaal
Beste Fluterd,
de kolom die je gebruikt (Bond Elut Certify) is ontwikkeld voor zure componenten, niet basische (volgens de website van de fabrikant)!
wat betreft het grote verlies:
Als ik je goed begrijp, voeg je de standaard toe aan het elutiemiddel en dan heb je t.o.v. een directe prik van de standaard een groot verlies?
Dan kan het volgens mij zo zijn dat de standaard wordt afgebroken door je elutiemiddel(?)
de kolom die je gebruikt (Bond Elut Certify) is ontwikkeld voor zure componenten, niet basische (volgens de website van de fabrikant)!
wat betreft het grote verlies:
Als ik je goed begrijp, voeg je de standaard toe aan het elutiemiddel en dan heb je t.o.v. een directe prik van de standaard een groot verlies?
Dan kan het volgens mij zo zijn dat de standaard wordt afgebroken door je elutiemiddel(?)
-
- Berichten: 5
Re: SPE - verlies van signaal
Hallo,
Volgens mij zijn de Bond Elut Certify kolommen wel degelijk bedoeld voor basische componenten : "The Certify extraction cartridge utilizes a packed bed consisting of a special, non-polar C8 sorbent and a strong cation exchanger (SCX). Certify is most commonly used to extract basic (cationic) drugs from urine and blood, but it is also very effective for extraction of a wide range of compounds from all manner of aqueous matrices." (komt van de site van Varian)
Ik damp het elutiemiddel in, daarna voeg ik standaard toe en dit injecteer ik.
Wanneer ik het elutiemiddel rechtstreeks indamp (dwz zonder dat het langs de SPE kolom loopt) en dan standaard toevoeg is er geen enkel probleem. Het elutiesolvent valt dus uit te sluiten als oorzaak.
Groetjes
Volgens mij zijn de Bond Elut Certify kolommen wel degelijk bedoeld voor basische componenten : "The Certify extraction cartridge utilizes a packed bed consisting of a special, non-polar C8 sorbent and a strong cation exchanger (SCX). Certify is most commonly used to extract basic (cationic) drugs from urine and blood, but it is also very effective for extraction of a wide range of compounds from all manner of aqueous matrices." (komt van de site van Varian)
Ik damp het elutiemiddel in, daarna voeg ik standaard toe en dit injecteer ik.
Wanneer ik het elutiemiddel rechtstreeks indamp (dwz zonder dat het langs de SPE kolom loopt) en dan standaard toevoeg is er geen enkel probleem. Het elutiesolvent valt dus uit te sluiten als oorzaak.
Groetjes
-
- Berichten: 5
Re: SPE - verlies van signaal
Het gebruikte protocol is trouwens ook afkomstig van Varian en is specfiek bedoeld voor de analyse van deze basische componenten op deze SPE-cartridges!
-
- Berichten: 2.399
Re: SPE - verlies van signaal
Algemene protocollen zijn alleen guide lines maar hoeven niet per definitie te werken. Welke basen gebruik je? Als je een quaternairy amine hebt dan is een SXC natuurlijk te sterk, omdat je de ladingen niet verbreken kunt. Op dit moment kan ik niet zeggen wat het probleem is omdat je de structuren niet geeft.
Ik zou eens verschillende fracties opvangen. Dus 1x elueren, nog een keer elueren etc. Elke fractie indampen en dan kijken of je het analiet terug krijgt. Probeer de oorzaak te isoleren. Is het incomplete elutie dan zou ik eens gaan kijken of het ionische of hydrofobe interacties zijn die je moet verbreken.
Ik zou eens verschillende fracties opvangen. Dus 1x elueren, nog een keer elueren etc. Elke fractie indampen en dan kijken of je het analiet terug krijgt. Probeer de oorzaak te isoleren. Is het incomplete elutie dan zou ik eens gaan kijken of het ionische of hydrofobe interacties zijn die je moet verbreken.
