In een practicum proberen we het reducerend vermogen en activiteitsbepaling van alfa-amylase te achterhalen. Het principe is:" wateroplosbaar zetmeel(vooral amylose) wordt door alfa-amylase afgebroken bij 25 °C en pH 6.8 in aanwezigheid van NaCl. De activiteit wordt absoluut bepaald en uitgedrukt in nkat/ml(katal= aantal mol glycosidische bindingen die per seconde gesplitst worden) De gevormde reducerende groepen worden iodometrisch bepaald." We werken dus met 2 erlenmeyers(één met onbekende en één met een blanco): we doen in elk de zetmeeloplossing, vervolgens in elk de een bufferoplossing, elk in een warmwaterbad van 25 °C, bij de onbekende de enzymoplossing( niet bij de blanco), bij elk 10 min wachten, bij elk HCl toevoegen, bij de blanco de enzymoplossing toevoegen, en dan bij elk de iometrie uitvoeren.
mijn vraagjes hierover:
1) De bufferoplossing is zeker om de constante pH van 6.8 te behouden?
2) Waarom wordt NaCl toegevoegd?
3) Waarom wordt HCl toegevoegd? Is dit niet om de enzymactiviteit stop te zetten, in het recept staat 1M HCl dus ik vermoed dat het dit is,
Alvast bedankt!
Laatste berichten
-
22:08
wig 11
-
21:37
speciale rel. theorie 12
-
21:22
[scheikunde] vraag Chemie - wat is de oplossing? 11
-
20:14
Aardlek-schakelaar 2
-
15:56
Programmeren met vectoren 6
-
14:53
Straatklok loopt 5 minuten voor 12
-
25 apr
Gravity and gravitation 4
-
25 apr
Bruine vlekken op treinaanwijzerbord 10
-
25 apr
Vogels in de stad zijn goede klussers 2
-
25 apr
Rood laserlicht 3
-
25 apr
Herleiden afmetingen vanaf een foto 21
-
25 apr
[wiskunde] Prijs Product per KG; Alternatief Inzicht 3
-
25 apr
do-re-mi-fa-so vliegtuigen 9
-
25 apr
geen minkowski-ruimte toch? Doe ik dit nou fout? 17
-
25 apr
[natuurkunde] kroon van koning op Syracuse 10
-
25 apr
2013 – Augustus Vraag 3 3
-
24 apr
Vraag 2009 Juli Vraag 5 5
-
24 apr
positie 2
-
24 apr
Schroefdraad berekening 8
-
24 apr
[scheikunde] Kan chloorgas de geleiding van elektriciteit belemmeren? 9
Nieuwsberichten
-
04 mar
Een nieuw soort magnetisme: altermagnetisme
-
31 okt
AI kan via stem diabetes vaststellen 11
-
21 okt
Einstein krijgt wéér gelijk 45
-
07 feb
witter dan wit 20
-
19 jun
irrigatie en de aardas
[scheikunde] paar vraagjes over een practicum over alfa-amylase
Moderators: ArcherBarry, Fuzzwood
-
- Berichten: 150
Re: [scheikunde] paar vraagjes over een practicum over alfa-amylase
1) Correct, zodat de enzymatische activiteit zo constant mogelijk blijft.
2) Ben ik niet zo heel zeker, maar misschien om het enzyme beter oplosbaar te houden. (afscherming van ladingen)
3) Ook correct. Door toevoegen van een grote hoeveelheid sterk zuur zal de tertiaire structuur van het eiwit verloren gaan, m.a.w.: het enzym verliest zijn functie.
2) Ben ik niet zo heel zeker, maar misschien om het enzyme beter oplosbaar te houden. (afscherming van ladingen)
3) Ook correct. Door toevoegen van een grote hoeveelheid sterk zuur zal de tertiaire structuur van het eiwit verloren gaan, m.a.w.: het enzym verliest zijn functie.
-
- Berichten: 212
Re: [scheikunde] paar vraagjes over een practicum over alfa-amylase
ik heb ook nog een paar vraagjes over het verdere verloop van het practicum( de iodometrische tritratie):
1) Ze vermelden hier dat "bij elke splitsing een een eindstandige alpha-glucose, dus een hemiacetalgroep of een reducerend groep vrijkomt. De gevormde reducerende groepen worden iodometrisch bepaald". Vervolgens vermelden ze 3 reacties die plaatsvinden bij de titratie waarvan ik één niet begrijp waar ze vankomt. RCOH(aldehyde) + H2O => RCOO- +3H+ +2e- ?? Ik dacht ten eerste dat als een aldehyde reageert met water er een hydraat gevormd werd en ten tweede van waar haalt men die aldehyde??
Alvast bedankt
PS: ik denk ook dat NaCl voor de oplosbaarheid is.(bedankt!)
1) Ze vermelden hier dat "bij elke splitsing een een eindstandige alpha-glucose, dus een hemiacetalgroep of een reducerend groep vrijkomt. De gevormde reducerende groepen worden iodometrisch bepaald". Vervolgens vermelden ze 3 reacties die plaatsvinden bij de titratie waarvan ik één niet begrijp waar ze vankomt. RCOH(aldehyde) + H2O => RCOO- +3H+ +2e- ?? Ik dacht ten eerste dat als een aldehyde reageert met water er een hydraat gevormd werd en ten tweede van waar haalt men die aldehyde??
Alvast bedankt
PS: ik denk ook dat NaCl voor de oplosbaarheid is.(bedankt!)
-
- Berichten: 150
Re: [scheikunde] paar vraagjes over een practicum over alfa-amylase
Die reactie is toch een oxidatie van het aldehyde naar een carbonzuur?
Dit is dus eigenlijk een van de deelreacties van de redoxreactie.
Dit is dus eigenlijk een van de deelreacties van de redoxreactie.
-
- Berichten: 212
Re: [scheikunde] paar vraagjes over een practicum over alfa-amylase
ja, oké maar waar komt die aldehyde vandaan? Dat zit toch niet in je alpha-glucose die wordt afgesplitst?
-
- Berichten: 150
Re: [scheikunde] paar vraagjes over een practicum over alfa-amylase
De niet cyclische vorm van glucose bevat een aldehyde, die opnieuw vrijkomt (uit de cyclische vorm) tijdens de redoxreactie.
-
- Berichten: 212
Re: [scheikunde] paar vraagjes over een practicum over alfa-amylase
Bij het instuderen van het practicum botste ik nog op een paar vraagjes.
1) wat kan je zeggen over de activiteit van alpha-amylase als er 2 ml amylase toegevoegd wordt ipv 1 ml en dezelfde hoeveelheid thiosulfaat wordt verbruikt?
=> volgens mij vermindert die
2) wat men de activiteit als er 50 ml amylose wordt toegevoegd en evenveel thiosulfaat wordt verbruikt?
=> volgens mij vermindert die ook
3) wat gebeurt er met de poly en oligosacchariden na stopzetting enzymactviteit?
=> dat weet ik eigenlijk niet.
Kan iemand hierbij nog eens helpen?
1) wat kan je zeggen over de activiteit van alpha-amylase als er 2 ml amylase toegevoegd wordt ipv 1 ml en dezelfde hoeveelheid thiosulfaat wordt verbruikt?
=> volgens mij vermindert die
2) wat men de activiteit als er 50 ml amylose wordt toegevoegd en evenveel thiosulfaat wordt verbruikt?
=> volgens mij vermindert die ook
3) wat gebeurt er met de poly en oligosacchariden na stopzetting enzymactviteit?
=> dat weet ik eigenlijk niet.
Kan iemand hierbij nog eens helpen?
-
- Berichten: 37
Re: [scheikunde] paar vraagjes over een practicum over alfa-amylase
Bij die 3e vraag kan ik 2 mogelijkheden bedenken: ofwel niks omdat je de activiteit stil legt, ofwel: als we de activiteit stil leggen, doen we dit door HCl toe te voegen, een sterk zuur is een katalysator dat de hydrolyse van glycosidische bindingen bevordert, dus misschien zullen de polysacchariden en oligosacchariden dan volledig afgebroken worden tot glucose monomeren...yvesvdv schreef: Bij het instuderen van het practicum botste ik nog op een paar vraagjes.
1) wat kan je zeggen over de activiteit van alpha-amylase als er 2 ml amylase toegevoegd wordt ipv 1 ml en dezelfde hoeveelheid thiosulfaat wordt verbruikt?
=> volgens mij vermindert die
2) wat men de activiteit als er 50 ml amylose wordt toegevoegd en evenveel thiosulfaat wordt verbruikt?
=> volgens mij vermindert die ook
3) wat gebeurt er met de poly en oligosacchariden na stopzetting enzymactviteit?
=> dat weet ik eigenlijk niet.
Kan iemand hierbij nog eens helpen?
Groetjes
-
- Berichten: 3
Re: [scheikunde] paar vraagjes over een practicum over alfa-amylase
zijn de 2 andere vragen correct? want om de activiteit te bepalen van alfa-amylase komen de volumes van amylose als amylase toch niet in de formule? waardoor uw activiteit toch hetzelfde blijft?popsy schreef: Bij die 3e vraag kan ik 2 mogelijkheden bedenken: ofwel niks omdat je de activiteit stil legt, ofwel: als we de activiteit stil leggen, doen we dit door HCl toe te voegen, een sterk zuur is een katalysator dat de hydrolyse van glycosidische bindingen bevordert, dus misschien zullen de polysacchariden en oligosacchariden dan volledig afgebroken worden tot glucose monomeren...
Groetjes