HPLC
Moderator: ArcherBarry
-
- Berichten: 80
HPLC
Ik heb voor de bepaling van benzoezuur in toplexil een ijkreeks gemaakt.
Deze is bereid door 118 mg natriumbenzoaat op te lossen in 100 ml om zo een concentratie te krijgen van 1 g/l benzoezuur. Om een ijkreeks te maken heb ik 0,o t/m 0,5 ml van de stockoplossing opgelost in een eluens van 50%-50% methanol- azijnzuur-acetaatbuffer (0,1 M pH 5) in een maatkolf van 25 ml. De concentratie liepen hierbij op van 0,0 mg/ml t/m 0,5 mg/ml.
Nou heb ik een monster (Toplexil) met een theoretische gehalte van 6.68 mg/ml natriumbenzoaat. Omgerekend kom ik uit op een gehalte van 5,67 mg/ml benzoezuur.
Ik weet dat ik het monster 25 keer moet verdunnen. Maar hoe doe ik dat en met wat moet ik dit doen?
Moet dit worden verdund met de eluens als bij het maken van de ijkreeks of dient deze te worden verdund met water...
En als het gemengd wordt met water, wordt de natriumbenzoaat niet omgezet in een andere stof??
Ik hoop dat iemand me zo spoedig mogelijk kan helpen.
Deze is bereid door 118 mg natriumbenzoaat op te lossen in 100 ml om zo een concentratie te krijgen van 1 g/l benzoezuur. Om een ijkreeks te maken heb ik 0,o t/m 0,5 ml van de stockoplossing opgelost in een eluens van 50%-50% methanol- azijnzuur-acetaatbuffer (0,1 M pH 5) in een maatkolf van 25 ml. De concentratie liepen hierbij op van 0,0 mg/ml t/m 0,5 mg/ml.
Nou heb ik een monster (Toplexil) met een theoretische gehalte van 6.68 mg/ml natriumbenzoaat. Omgerekend kom ik uit op een gehalte van 5,67 mg/ml benzoezuur.
Ik weet dat ik het monster 25 keer moet verdunnen. Maar hoe doe ik dat en met wat moet ik dit doen?
Moet dit worden verdund met de eluens als bij het maken van de ijkreeks of dient deze te worden verdund met water...
En als het gemengd wordt met water, wordt de natriumbenzoaat niet omgezet in een andere stof??
Ik hoop dat iemand me zo spoedig mogelijk kan helpen.
-
- Berichten: 80
Re: HPLC
Sorry, de concentraties van de ijkreeks was 0,0 t/m 0,5 mg/ 25 ml benzoezuur.
Kan er na het uitvoeren van het experiment de concentratie als volgt worden berekend?
- berekening:
Concentratie monster, bepaald aan de hand van de ijkreeks : 0,476 mg/25ml benzoezuur
0,476 /25 = 0,01904 mg/ml
Het monster is 250x verdund met de eluens (Ik weet niet of dit wel mag/kan?)
0,01904*250 = 4,76 mg/ml
-terugberekening:
concentratie monster: 5.67 mg/ml
Verdunning: 1ml monster oplossen in eluens tot 250 ml in een maatkolf
5,67 / 250 = 0,02268 mg/ml
Er zal 1 ml van deze verdunde monster worden gepipetteerd in 25 ml
Om het gelijknamig te maken met de ijkreeks: 0,02268 * 25 ml = 0,567 mg/25 ml
Kan ik op deze manier gaan extrapoleren? (aangezien het buiten de ijkreeks valt).
Kan er na het uitvoeren van het experiment de concentratie als volgt worden berekend?
- berekening:
Concentratie monster, bepaald aan de hand van de ijkreeks : 0,476 mg/25ml benzoezuur
0,476 /25 = 0,01904 mg/ml
Het monster is 250x verdund met de eluens (Ik weet niet of dit wel mag/kan?)
0,01904*250 = 4,76 mg/ml
-terugberekening:
concentratie monster: 5.67 mg/ml
Verdunning: 1ml monster oplossen in eluens tot 250 ml in een maatkolf
5,67 / 250 = 0,02268 mg/ml
Er zal 1 ml van deze verdunde monster worden gepipetteerd in 25 ml
Om het gelijknamig te maken met de ijkreeks: 0,02268 * 25 ml = 0,567 mg/25 ml
Kan ik op deze manier gaan extrapoleren? (aangezien het buiten de ijkreeks valt).
-
- Berichten: 80
Re: HPLC
Maar ik moet de monster eerst 25x verdunnen (eerste stap), hiervan 1ml overbrengen in een maatkolf van 25 ml en aanvullen met de eluens om het gelijk te maken aan de ijkreeks ( concentratie= mg/ 25ml).
Nou weet ik dat de laatste stap met het eluens moet, maar moet het ook bij de verdunning (eerste stap).
Principe:het monster bevat natriumbenzoaat en aangezien er benzoezuur wordt gemeten, is de eluens samengesteld met methanol en een buffer.
Nou is mijn vraag hoe de verdunning het beste kan worden bereid? Ik hoop dat er zo snel mogelijk wordt gereageerd :S
Nou weet ik dat de laatste stap met het eluens moet, maar moet het ook bij de verdunning (eerste stap).
Principe:het monster bevat natriumbenzoaat en aangezien er benzoezuur wordt gemeten, is de eluens samengesteld met methanol en een buffer.
Nou is mijn vraag hoe de verdunning het beste kan worden bereid? Ik hoop dat er zo snel mogelijk wordt gereageerd :S
- Berichten: 851
Re: HPLC
Zie de reactie van FuzzwoodNou weet ik dat de laatste stap met het eluens moet, maar moet het ook bij de verdunning (eerste stap).
En in principe zijn de stappen voor verdunning van een ijkreeks ook toepasbaar op je monster verdunningen.Altijd verdunnen met eluens, anders krijg je het oplosmiddeleffect; dat je oplosmiddel ook een signaal gaat geven.
In theorie: Als je een goede ijklijn hebt dan kan je een waarde die er buiten valt extrapoleren. Let wel op met apparatuur limieten en nauwkeurigheid.Kan ik op deze manier gaan extrapoleren? (aangezien het buiten de ijkreeks valt).
Ik snap alleen niet helemaal waarom je wilt extrapoleren want je zegt zelf: "Concentratie monster, bepaald aan de hand van de ijkreeks : 0,476 mg/25ml benzoezuur"
Jurn [WSF - Technicus]
It is better to be silent and be thought a fool, than to speak and remove all doubt -- Abraham Lincoln
Duct tape is like the force. It has a light side, a dark side, and it holds the universe together.... - Carl Zwanzig
It is better to be silent and be thought a fool, than to speak and remove all doubt -- Abraham Lincoln
Duct tape is like the force. It has a light side, a dark side, and it holds the universe together.... - Carl Zwanzig