HPLC

Nawara

Ik heb dringend hulp nodig!! Kan iemand me zo spoedig mogelijk helpen?!

Ik heb een monster (Toplexil; Gehalte benzoezuur: 5,64 mg/ml) en moet daarvan de exacte gehalte benzoezuur bepalen.

Hierbij heb ik het monster verdund door 1 ml te nemen en het te verdunnen tot 10 ml in een maatkolf. Concentratie wordt dan 0,564 mg/ml.

Omdat de ijkreeks van 0,0 t/m 0,5 mg/25ml is heb ik van het verdunde oplossing 1 ml genomen en het aangevuld tot 25 ml.

Maar wat wordt hiervan de uiteindelijke concentratie (in ?/25ml) ?

Ik hoop dat iemand me met spoed kan antwoorden. Moet het namelijk voor zondag al weten :S

Gerard

Je hebt 0,564 mg/ml in je verdunde oplossing

1 ml bevat dan 0,564 mg en die verdun je naar 25 ml.

Ra ra hoeveel mg zit er in 25 ml?

Nawara

ik denk 0,564 mg/25 ml.

Oke, maar stel ik heb een concentratie van 0,225 mg/25 ml gekregen bij het interpoleren, hoe reken ik dit (inclusief een verdunning van 25x in plaats van 10x) naar de werkelijke gehalte van het monster???? want dit moet ik doen en ik heb daar nogal moeite mee. :S

Fuzzwood

1) Klopt.

2) Dan moet je alle verdunningsstappen gewoon de andere kant op werken. Als je de omrekening van

Ik heb een monster (Toplexil; Gehalte benzoezuur: 5,64 mg/ml) en moet daarvan de exacte gehalte benzoezuur bepalen.

Hierbij heb ik het monster verdund door 1 ml te nemen en het te verdunnen tot 10 ml in een maatkolf. Concentratie wordt dan 0,564 mg/ml.

goed uitkrijgt, moet het omgekeerde toch ook geen probleem zijn?

Jij valt constant over die /25 ml. MAAR DIE BOEIT NIET!!! Het enige dat boeit is het volume dat je hebt gepipetteerd voordat je dat aanvulde.

Stel dat je stock x mg/ml bevatte. Je haalt daar 1 ml uit met je pipet, dan bevat je pipet dus x mg stof. Die dump je dan in je maatkolfje en vult dat aan tot 25 ml. Nu heb je dus een verdunde oplossing van x mg/25 ml.

(Ter referentie: Je stock bevat x g/l, je verdunde oplossing 0,04 g/l, inderdaad een verdunning van 25x)

Nawara

Dus wat ik er onder versta is dat ik het volgende doe:

Ik heb een monster (Toplexil; Gehalte benzoezuur: 5,64 mg/ml) en moet daarvan de exacte gehalte benzoezuur bepalen.

Hierbij heb ik het monster verdund door 1 ml te nemen en het te verdunnen tot 25 ml in een maatkolf.

Omdat de ijkreeks van 0,0 t/m 0,5 mg/25ml is heb ik van het verdunde oplossing 1 ml genomen en het aangevuld tot 25 ml.

Hierbij kreeg ik als resultaat voor de concentratie van het monster 0,225 mg/25 ml benzoezuur.

concentratie verdunde monster *verdunningsfactor = concentratie monster.

Dus 0,225 mg/25 ml benzoezuur * 25 = 5,623 mg/ml

(Kloppen hierbij de eenheden wel??) :S

Fuzzwood

Lijkt er wel op

Alleen even een kleinigheidje. Die 24 ml extra vloeistof die je toevoegde bevat geen benzoëzuur. Voor het gemak mag je dan zeggen dat je meetoplossing 0,225 mg/ml benzoëzuur bevat. Immers weet je dat al je benzoëzuur uit die ene gepipetteerde ml kwam.

Die 25 ml verwerk je in je factor 25 volgens eindvolume / gepipetteerd volume = 25 ml / 1 ml = 25.

Zou je 10 ml hebben gepipetteerd en aangevuld tot 150 ml, dan wordt je verdunningsfactoe 150 ml / 10 ml = 15. Daar stop je die volumes in.

Mocht je hier echt nog moeite mee hebben: teken dan uit wat je doet. Teken die pipet met de bijbehorende gegevens, teken die kolf waar je het indoet, etc.

Lijkt voor jou nu natuurlijk onzin (

heb ook HBO gedaan) maar als je later terugkijkt in je labjournaal kun je die berekeningen maar lastig volgen als je ze niet op de een of andere manier schematisch weergeeft.

Mocht je je afvragen waarom je überhaubt al die irritatie van een verdunning op je hals haalt: dat is om te zorgen dat je UV/vis detector niet over zijn nek gaat als er ineens een stormloop aan absorberende moleculen langsvliegt; dat ding zegt dan 100% absorptie, ongeacht wat de concentratie eigenlijk was.

Nawara

Kloppen de eenheden ook??? @ Fuzzwood: Want gezien je referentie heb ik toch het gevoel dat ik fout zit...

Ik begrijp namelijk het gehalte van ../25 ml niet echt helemaal.

Ik heb een concentratie van 0,225 mg/25 ml gekregen, maar moet ik niet 0,225/25 = 0,009 doen om te weten wat er in 1 ml zit en het daarna pas vermenigvuldigen met de verdunningsfactor (25x)???

Fuzzwood

Omdat dat de concentratie in ml is van je nieuwe oplossing, niet van de oude. Die 0,009 mg/ml zegt verder niets over die ml die je gepipetteerd hebt, immers heb je die net al verdund tot 25 ml.

Ik heb een concentratie van 0,225 mg/25 ml gekregen, maar moet ik niet 0,225/25 = 0,009 doen om te weten wat er in 1 ml zit en het daarna pas vermenigvuldigen met de verdunningsfactor (25x)???

Al jouw benzoëzuur komt uit die ene gepipetteerde ml. Al gooi ik daar een oceaan aan water bij, dat verandert niets aan het feit dat de concentratie in die pipet 0,225 mg/ml benzoëzuur was.

Nawara

0,225 mg/ml of 0,225 mg/25ml???? want ik neem aan dat dit een groot verschil maakt :s de stockoplossing heb ik bereid door natriumbenzoaat te mengen met het eluens (50/50 methanol/azijnzuur-acetaatbuffer) om zo benzoezuur te vormen.

Bereiding van verdunning van het monster: 1 ml van het monster en aanvullen tot 25 ml met het eluens. (Het monster bevat namelijk natriumbenzoaat, maar om deze om te zetten in benzoezuur heb ik deze dus aangevuld met het eluens.)

Vervolgens 1 ml van het verdunde oplossing gepipetteerd in een maatkolf van 25 ml en aangevuld met het eluens.

Fuzzwood

0,225 mg/ml of 0,225 mg/25ml???? want ik neem aan dat dit een groot verschil maakt :s

Nee hoor, je vergeet wederom waar je benzoëzuur vandaan komt. Bij die laatste oplossing kun je een oceaan aan water bij doen, verandert niets aan het feit dat daar 0.225 mg aan benzoëzuur bij zit.

Die komt nl hieruit:

Bereiding van verdunning van het monster: 1 ml van het monster en aanvullen tot 25 ml met het eluens.

Laat ik het even maar helemaal uitwerken.... voorberekening:

Ik heb een monster x waar ongeveer 5,64 mg/ml aan benzoëzuur inzit. Ik haal daar 1 ml uit met een pipet. In mijn pipet zit 5,64 mg/ml * 1 ml = 5,64 mg.

Ik vul deze aan tot 25 ml. Concentratie verdunning = 5,64 mg/25 ml = 0,226 mg/ml.

Ik haal daar 1 ml uit met een pipet. In mijn pipet zit 0,226 mg/ml * 1 ml = 0,226 mg.

Ik vul deze aan tot 25 ml. Concentratie meetoplossing = 0,226 mg/25 ml = 0,009 mg/ml <-- en hier val jij over, waarschijnlijk omdat die 25 nogal vaak voorkomt. Die laatste verdunning doet er niet toe, die verandert niets aan het feit dat jij in die laatste oplossing 0,226 mg benzoëzuur stopte.

Met dat in ons achterhoofd gaan we terugrekenen:

Het "HPLC-monster" vindt in de meetoplossing 0,009 mg/ml aan benzoëzuur. In ons flesje meetoplossing zit dan in totaal 0,009 mg/ml * 25 ml = 0,225 mg benzoëzuur. Deze hoeveelheid hebben we erin gestopt met een 1ml-pipet. De concentratie in de pipet was dan 0,225 mg/ml. Ik heb deze gehaald uit een oplossing (de verdunning) van 25 ml. In deze oplossing zit een totaal aan 0,225 mg/ml * 25 ml = 5,625 mg aan benzoëzuur. Deze 5,625 mg heb ik met een 1ml-pipet uit de monsteroplossing gehaald. Deze monsteroplossing bevatte 5,625 mg/ml aan benzoëzuur.

En nu zijn we er.

Nawara

Oke ik denk dat ik het nu wel begin te begrijpen...

even kijken of ik het wel goed heb begrepen:

Stel ik heb een stockoplossing van 1000mg/L en ik wil er uiteindelijk 0,1 mg/25ml hebben. Dan moet ik 0,1 ml pipetteren van de stock en deze aanvullen tot 25 ml.

Concentratie= 0,1 mg/25ml

Fuzzwood

Dat klopt inderdaad.

Nawara

oke ik snap het en dan nog een vraag.

Ik moet een dode tijd hebben voor de berekening van de capaciteitsfactor. Nou had ik dat bij de vorige experiment bepaald met behulp van uracil.

Maar mag ik het gemiddelde nemen van de retentietijd van uracil van het vorige experiment en het meenemen naar een ander experiment?

PS: er is wel steeds met hetzelfde hplc gewerkt

Fuzzwood

Dan mag dat inderdaad. Het enige wat er invloed zou kunnen hebben is dat de eluenssamenstelling veranderd kan zijn wat de dode tijd uiteraard beïnvloedt, maar dat lijkt me niet echt belangrijk nu.

Nawara

want bij het bepalen van de dode tijd van uracil is er een eluens gebruikt van methanol en water.

En bij dit experiment is er een eluens van methanol en azijnzuur-acetaatbuffer 0,1 M ph 5

Wetenschapsforum

Laatste berichten

Nieuwsberichten

HPLC

HPLC

Re: HPLC

Re: HPLC

Re: HPLC

Re: HPLC

Re: HPLC

Re: HPLC

Re: HPLC

Re: HPLC

Re: HPLC

Re: HPLC

Re: HPLC

Re: HPLC

Re: HPLC

Re: HPLC